[发明专利]从含有游离核酸的样品中分离游离核酸的方法和系统

说明书

本发明公开了一种从含有游离核酸的样品中分离游离核酸的方法，其包括在测试样品中加入蛋白酶K和与裂解‑结合溶液，离心后加入醇类物质并与固相载体接触，使样品中的游离核酸结合到所述固相载体，再用一种或多种洗涤溶液洗涤所述固相载体，最后向所述固相载体加入洗脱液，得到目标产物游离核酸；其中所述裂解‑结合溶液的pH为酸性，且所有步骤在常温条件下进行。本发明还公开了一种分离游离核酸的系统，其包括裂解‑结合溶液、洗涤溶液、洗脱溶液，以及储液管、核酸纯化柱管，和真空适配管。本发明所述的分离游离核酸的方法和系统，操作简便，成本经济，适用性广，得率高纯度可靠，具有广泛的应用价值和良好的市场前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及从含有游离核酸的样品中分离游离核酸的方法和系统。

背景技术

游离核酸广泛应用于分子生物学领域的研究和临床分析。尤其是在精准医学快速发展的今天，诸多基于液体活检技术的检测和诊断都需要先从样品比如说血浆样品中分离获取细胞游离核酸。现有技术中大量存在分离来自细胞核酸的方法和试剂盒，但鉴于游离核酸具有微量及小片段的特征，在提取过程中容易丢失，目前市场上对于分离游离核酸的选择很有限。常用的核酸提取方法有硅胶膜吸附柱法、酚-氯仿法和磁珠法。硅胶膜吸附柱法快速简便纯度高，但是现有产品更适用于分离较完整的基因组DNA而不是游离核酸；酚-氯仿法的优点是成本低，但是效率低重复率差而且有毒；磁珠法通量高自动化程度好速度快，但是纯度低且易出现盐分残留，不适用微量核酸。

对于主流的核酸分离方法：硅胶膜吸附柱法，最新研究发现DNA与柱表面结合的主要方式是其磷酸基团与柱表面硅烷醇基团之间形成的氢键。加入缓冲液形成阳离子桥的作用是帮助DNA与硅烷醇形成氢键，故缓冲液中盐离子的种类和浓度都对DNA与柱表面的结合效率起到至关重要的影响。同时，pH值和温度也是影响结合纯度和得率的重要因素。目前市场的核酸分离产品主要采取先裂解样本和结合到柱相分离的步骤，使用不同的缓冲液和温度、pH条件，通常在热水浴孵育裂解样本后还要冷却放置后才能结合上柱，步骤繁杂，操作条件苛刻，不能很好地满足大量多次分离获取游离核酸的需求。

发明内容

如何在保证得率和纯度的前提下，尽量减少游离核酸分离提取所需的步骤，放宽反应条件，节约时间和经济成本，是本发明主要解决的技术问题。

为了解决上述技术问题，本发明首先提供一种从含有游离核酸的测试样品中分离游离核酸的方法，其包括：

1)在所述测试样品中加入蛋白酶K和裂解-结合溶液得到待结合样品；

2)将所述待结合样品离心后加入醇类物质；

3)将上一步加入了醇类的待结合样品与固相载体接触，使所述待结合样品中的游离核酸结合到所述固相载体；

4)用一种或多种洗涤溶液洗涤所述固相载体，用于去除目标产物游离核酸以外的物质；

5)向所述固相载体加入洗脱液，用于洗脱结合于所述固相载体的游离核酸，得到目标产物游离核酸；

其中所述裂解-结合溶液的pH为酸性，且上述所有步骤在常温下进行。

另一方面，本发明还提供一种用于从含有游离核酸的测试样品中分离游离核酸的系统，其包括适用于所述本发明从含有游离核酸的样品中分离游离核酸的方法的裂解-结合溶液、洗涤溶液、以及洗脱溶液。

具体实施方式

本发明发明人经过大量探索性研究，提供了一种从含有游离核酸的样品中分离游离核酸的方法，所述分离游离核酸的方法操作简单、结果可靠，尤其对于非核来源的游离核酸具有良好的分离提取效果，在此基础上完成了本发明。

本发明第一方面提供一种从含有游离核酸的测试样品中分离游离核酸的方法，其包括：

1)在所述测试样品中加入蛋白酶K和裂解-结合溶液得到待结合样品；