[发明专利]一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法

权利要求书

1.一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取rHSA GS115工程菌液，转接于900-1000倍菌液体积的第一YPD培养基上震荡培养16-18h，得到一级菌液，将所述一级菌液继续转接于900-1000倍菌液体积的第二YPD培养基上震荡培养16-18h，得到种子液备用；

(2)向种子液中加入为其体积4-6倍的发酵培养基中进行发酵，温度为27-29℃，pH为5.5-6.0，转速设定为200-800rpm，溶氧水平保持在19％-21％，得到发酵液；

(3)当溶氧水平大幅上升时，向发酵液中连续流加浓度为8-12g/L的甘油补料液，得到补料后发酵液；

(4)当溶氧水平再次大幅上升时，连续流加甲醇诱导液和辅助诱导剂进行诱导，甲醇的浓度保持在8-12ml/L，调节pH为5.9-6.1，温度为20-23℃，诱导60-80h后得到诱导后发酵液；

(5)将所述诱导后发酵液离心、分装后冷冻保存，即得含有重组人血清白蛋白的发酵液。

2.根据权利要求1所述的一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法，其特征在于，步骤(1)中，所述第一YPD培养基和第二YPD培养基的配制方法为：取胰蛋白胨20g、酵母提取物10g，溶于去离子水并定容至900mL，121℃高压蒸汽灭菌20分钟，待冷却后加入200g/L的葡萄糖100mL。

3.根据权利要求1所述的一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法，其特征在于，步骤(1)中，所述培养温度为28-31℃。

4.根据权利要求1所述的一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法，其特征在于，步骤(2)中，所述发酵培养基含有23-35g/L的酵母提取物和8-12g/L的甘油。

5.根据权利要求1所述的一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法，其特征在于，步骤(3)中，所述甘油补料液中含有10-12ml/L的PTM₁和10g/L的甘油。

6.根据权利要求1所述的一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法，其特征在于，步骤(4)中，采用气相色谱离线监测法控制甲醇的流加。

7.根据权利要求1所述的一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法，其特征在于，步骤(4)中，所述甲醇诱导液中含有10-12ml/L的PTM₁和1％体积分数的甲醇。

8.根据权利要求1所述的一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中，所述PTM₁的配制方法为：取五水合硫酸铜6g、碘化钠0.08g、一水合硫酸镁3g、二水合钼酸钠0.2g、硼酸0.02g、氯化钴0.5g、氯化锌20g、七水合硫酸铁65g、生物素0.2g以及硫酸5mL，一同溶于去离子水并定容至1L。

9.根据权利要求1所述的一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法，其特征在于，步骤(4)中，所述辅助诱导剂包括10mM的维生素C、体积分数为0.5％的酪蛋白水解物、1g/L丙氨酸、1g/L赖氨酸、1g/L亮氨酸、1g/L谷氨酸。

10.根据权利要求1所述的一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法，其特征在于，步骤(5)中，所述离心以7000-8000rpm的转速在2-4℃下离心5-15min，所述冷冻保存的温度为零下80℃到零下20℃。