[发明专利]一种磷酸钙转染细胞的方法在审
| 申请号： | 201910407479.3 | 申请日： | 2019-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN110229836A | 公开（公告）日： | 2019-09-13 |
| 发明（设计）人： | 王小文;胡嘉彪;黄春;蒋迎九;吴庆琛 | 申请（专利权）人： | 重庆医科大学附属第一医院 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 许亦琳;余明伟 |
| 地址： | 400016*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转染 混合液 磷酸钙 泡沫混合液 混合液三 培养容器 转染细胞 培养基 细胞 混匀 新鲜培养基 起泡 室温孵育 贴壁培养 细胞接种 转染效率 质粒DNA 无菌水 吹打 孵育 贴壁 质粒 制备 沉淀 | ||
1.一种磷酸钙转染细胞的方法，其特征在于，所述方法至少包括以下步骤：
1)将细胞接种于含有培养基的培养容器中贴壁培养，培养至所贴壁的培养容器壁总面积的60％-70％时即可开始转染，得到待转染的细胞；
2)制备磷酸钙-质粒DNA沉淀：向质粒中加入Cacl2水溶液，再加入无菌水，混匀，得到混合液一；
3)将与所述混合液一等体积的Cacl2水溶液吹打起泡，得到泡沫混合液二；
4)将所述混合液一加入所述泡沫混合液二中，室温孵育得到混合液三；
5)给所述待转染的细胞更换新鲜培养基，静置；
6)将混合液三加入所述待转染的细胞所在的培养基中，混匀后孵育。
2.如权利要求1所述的磷酸钙转染细胞的方法，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：
(1)步骤2)中，所述Cacl2水溶液的摩尔浓度为2.5-3mol/L；
(2)步骤2)中，所述Cacl2水溶液的摩尔浓度为2.5mol/L。
3.如权利要求1所述的磷酸钙转染细胞的方法，其特征在于，步骤3)中，所述Cacl2水溶液与所述步骤2)中Cacl2水溶液的摩尔浓度相同。
4.如权利要求1所述的磷酸钙转染细胞的方法，其特征在于，步骤4)中，采用滴加法将所述混合液一加入到所述泡沫混合液二中。
5.如权利要求1所述的磷酸钙转染细胞的方法，其特征在于，步骤4)中，将所述混合液一加入所述泡沫混合液二的过程在2min内完成。
6.如权利要求1所述的磷酸钙转染细胞的方法，其特征在于，步骤6)中，采用滴加法将混合液三加入到所述待转染的所在的培养基中。
7.如权利要求1所述的磷酸钙转染细胞的方法，其特征在于，步骤6)中，孵育条件为5％CO2，37℃。
8.如权利要求1所述的磷酸钙转染细胞的方法，其特征在于，步骤6)中，孵育开始后18-24小时更换一次新鲜培养基。
9.如权利要求1所述的磷酸钙转染细胞的方法，其特征在于，所述培养基选自10％FBS-DMEM-F12。
10.如权利要求1所述的磷酸钙转染细胞的方法，其特征在于，所述细胞为293T细胞。
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