[发明专利]一种磷酸钙转染细胞的方法

说明书

本发明涉及一种磷酸钙转染细胞的方法，所述方法至少包括以下步骤：1)将细胞接种于含有培养基的培养容器中贴壁培养，培养至所贴壁的培养容器壁总面积的60％‑70％时即可开始转染，得到待转染的细胞；制备磷酸钙‑质粒DNA沉淀：向质粒中加入Cacl₂水溶液，再加入无菌水，混匀，得到混合液一；将与所述混合液一等体积的Cacl₂水溶液吹打起泡，得到泡沫混合液二；将所述混合液一加入所述泡沫混合液二中，室温孵育得到混合液三；给所述待转染的细胞更换新鲜培养基，静置；将混合液三加入所述待转染的细胞所在的培养基中，混匀后孵育。本方法提高了转染效率，操作步骤简单、结果可靠、重复性好等特点。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种磷酸钙转染细胞的方法。

背景技术

将DNA导入动物细胞中的方法很多，磷酸钙转染法经济简单而且对细胞无毒性，是目前做真核细胞转染最常用的方法之一。该法作为常规方法用于多种细胞的基因转染，可获得短暂或长期表达。但是随着该技术的广泛应用，人们发现在磷酸钙转染法中，影响转染成功与否及转染效率的高低的因素较多，经常造成转染的低效率和不稳定性。存在操作步骤多、耗时长，常常造成转染效率低和不稳定的情况。

如何用磷酸钙法提高质粒高效稳定的转染细胞是目前需要解决的一个问题。

发明内容

为了克服现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供一种磷酸钙转染细胞的方法，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供了一种磷酸钙转染细胞的方法，至少包括以下步骤：

1)将细胞接种于含有培养基的培养容器中贴壁培养，培养至所贴壁的培养容器壁总面积的60％-70％时即可开始转染，得到待转染的细胞；

2)制备磷酸钙-质粒DNA沉淀：向质粒中加入Cacl₂水溶液，再加入无菌水，混匀，得到混合液一；

3)将与所述混合液一等体积的Cacl₂水溶液吹打起泡，得到泡沫混合液二；

4)将所述混合液一加入所述泡沫混合液二中，室温孵育得到混合液三；

5)给所述待转染的细胞更换新鲜培养基，静置；

6)将混合液三加入所述待转染的细胞所在的培养基中，混匀后孵育。

在一种实施方式中，步骤1)中，所述培养容器为培养皿。

在一种实施方式中，步骤2)中，所述质粒包括重组穿梭质粒和骨架质粒。

在一种实施方式中，步骤2)中，所述Cacl₂水溶液的摩尔浓度为2.5～3mol/L。可选的，为2.5mol/L。

在一种实施方式中，步骤3)中，所述Cacl₂水溶液与所述步骤2)中Cacl₂水溶液的摩尔浓度相同。

在一种实施方式中，步骤4)中，采用滴加法将所述混合液一加入到所述泡沫混合液二中。

在一种实施方式中，步骤4)中，将所述混合液一加入所述泡沫混合液二的过程在2min内完成。

在一种实施方式中，步骤6)中，采用滴加法将混合液三加入到所述待转染的293T所在的培养容器中。

在一种实施方式中，步骤6)中，孵育条件为5％CO₂，37℃。其中，CO₂浓度以体积分数表示。

在一种实施方式中，步骤6)中，孵育开始后18-24小时更换一次新鲜培养基。