[发明专利]一种细菌富硒蛋白的制备方法与应用

权利要求书

1.一种细菌富硒蛋白的制备方法，其特征在于：茶树内生草螺菌在含硒酸盐的培养基中发酵，可将硒酸盐还原后再经过硒蛋白合成代谢途径合成硒蛋白。

2.如权利要求1所述的一种细菌富硒蛋白的制备方法，其特征在于：所述的茶树内生草螺菌在含硒酸盐培养基中的发酵制备方法包括如下步骤：

（1）茶树内生草螺菌与硒酸盐共培养合成硒蛋白：首先将茶树内生草螺菌菌种接种营养肉汤培养基，每分钟150转摇动，28 °C培养过夜；然后将活化的菌液以体积比1:100接入含有10 mM 硒酸钠的LB液体培养基中，摇床转速每分钟250转，温度为37 °C，培养至OD₆₀₀=0.8；最后在发酵罐中发酵，按照发酵培养基体积1%的接种量接入已培养好的菌液，在温度为37℃、转速200 rpm、pH7.0、通气量为1 v/v^.min条件下发酵24-48 小时至OD₆₀₀=2；

（2）可溶性硒蛋白的制备：发酵完成后,在转速6000 rpm、4℃离心15分钟收集菌体，并用0.1 M PBS悬浮，再在相同条件下重复离心洗涤2次以去掉培养物中的残留成分；将离心收集的菌体悬浮在溶液I中,超声波破碎菌体，转速12000 rpm、4℃离心15-20分钟，去掉沉淀物并收集上清液；合并收集的上清液用溶液II 4℃透析过夜,中间更换3次溶液II以除去蛋白溶液中的小分子无机物，透析后即为硒蛋白制品。

3.如权利要求2所述的一种细菌富硒蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中的发酵培养基组成为：1%蛋白胨、0.5%酵母提取物、1%氯化钠、50-100 mM硒酸钠、水1L，pH7.2。

4.如权利要求2所述的一种细菌富硒蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的溶液I为0.1 mM EDTA、50 mM TrisHCl,pH8.0；溶液II为0.1 mM EDTA、50 mM PBS, pH7.4。

5.一种细菌富硒蛋白的应用，其特征在于：所述的细菌富硒蛋白可直接喷洒到鱼饲料上凉干后喂鱼；也可以添加到鱼饲料内制备含硒鱼饲料。