[发明专利]一种含铁蛋白的荧光鉴定方法

说明书

本发明提供一种含铁蛋白的荧光鉴定方法，涉及材料化学和蛋白质鉴定技术领域。所述鉴定方法采用自制的石墨烯量子点（GQDs）与含铁蛋白相互作用促使GQDs荧光快速猝灭的分子荧光光谱分析技术。GQDs的制备是采用直链淀粉为绿色原料，于反应釜中水热反应，自然冷却后离心形成的黄色澄清液体既为GQDs溶液。所制备的GQDs可以与Fe³⁺和含铁蛋白有效结合，导致荧光瞬间猝灭，从而实现含铁蛋白的鉴定。该鉴定方法操作简便快捷，样品消耗量少，使用成本低，可特异性猝灭含铁蛋白，有效去除基质干扰，鉴定结果可靠，可用于铁缺乏疾病的初期筛查，具有很大的使用价值和市场前景。

技术领域

本发明涉及一种含铁蛋白的荧光鉴定方法，涉及材料化学和蛋白质鉴定技术领域。

背景技术

含铁蛋白作为一种灵敏、微量、有实用诊断价值的指标，已受到血液、肿瘤、营养等临床学科的重视，取得了卓有成效的研究及应用。含铁蛋白可以与小分子化合物结合，如多酚类小分子化合物没食子酸( gallic acid，GA) ，研究其与GA的相互作用，可为作为小分子药物模型的GA在医药领域的应用提供理论依据。含铁蛋白还可以通过与氧化铁纳米颗粒的相互作用，降低血红蛋白的过氧化物酶活性，增加细胞色素 C 的过氧化物酶活性。另外，含铁蛋白可以催化活性氮RNS转化为惰性的NO₃^-，阻止蛋白质的硝化；同时，含铁蛋白也可通过高价铁氧化物及·NO₂的产生来加速蛋白质的硝化。含铁蛋白与多种物质材料可以发生相互作用，且与人类生活等密切相关，含铁蛋白的鉴定在免疫显微剖析、疾病诊断、鉴别诊断、观察某些疾病活动，估计预后及复发，均具有一定的意义，研究其鉴定方法势在必行。

含铁蛋白鉴定方法多样，其中自动无焰原子吸收光谱分析法、放免分析法 (RIA)、免疫放射分析法 (IRMA) 灵敏度较高，是目前开展最为普遍的检测方法，但所需设备复杂昂贵，不利于推广。免疫单扩散技术操作简便，易于普及，但灵敏度低。核素掺入试验又不适于大量的临床常规检查。因此需要建立更直接、高效、简单的检测方法以提高含铁蛋白鉴定的应用价值。

分子荧光光谱分析是利用某些物质分子受光照射时所发生的荧光的特性和强度，进行物质的定性分析或定量分析的一种方法。它可以分析物质的荧光特性，如GQDs的荧光谱图形状、最大发射波长、发光强度等，并通过最大发射波长和强度的变化来判断ＤＮＡ的修饰情况。同时可通过研究 GQDs的光致发光发射谱来表征物质对GQDs荧光强度的影响。可用于目标分子的定性和定量分析，它的先进之处就在于它的鲜明性、特异识别性、广泛实用性。简单的操作，低廉的成本，直接的分析检测，目前已经发展成为一种重要且有效的光谱化学分析手段，在生物、食品、药物分析、环境分析等领域已应用颇广。

在众多分析方法中，由于分子荧光光谱分析具有灵敏度高、选择性好、快速、简单、信息量丰富，能提供荧光物质的多种参数等优点已引起国内分析界广泛重视。但由于很多物质本身不发荧光，使得找到一种合适的荧光物质至关重要。据此本发明利用自制GQDs设计一种含铁蛋白的鉴定方法，采用直链淀粉自制GQDs直接与含铁蛋白相互作用，并通过荧光强度猝灭来检测含铁蛋白，可用于含铁蛋白的直接鉴定，该鉴定方法简单明了，成本低廉，每次使用量少，反应快，检测迅速，直接出分析结果，可用于铁缺乏疾病的初期筛查。

发明内容

本发明的目的是提供一种含铁蛋白的荧光鉴定方法，用于一类蛋白（含铁蛋白）的识别与鉴定。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

所述一种含铁蛋白的荧光鉴定方法，具体步骤如下：

1) GQDs的制备

称取直链淀粉，加入25 mL蒸馏水在60 ℃下水浴加热15 min，取出加入反应釜中，烘箱中加热，自然冷却后移出，离心得黄色澄清液体于冰箱中冷藏，备用。

2）GQDs与金属离子的相互作用