[发明专利]一种诱导造血干细胞向前T系细胞分化的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种DLL4在制备诱导造血干细胞向前T细胞系分化药物中的应用，其特征在于，将人原代肝成纤维细胞过表达DLL4蛋白后与人造血干细胞共培养，获得诱导人造血干细胞向前T系细胞分化的药物，

增强CXCL12-CXCR4信号通路以促进人造血干细胞向T系细胞的发育；

所述的共培养在体外培养时，具体包括如下步骤：

(1)配制含15％FBS的MEMα培养基，并添加终浓度为25-50ng/mL的SCF、5-10ng/mL的Flt3L、1-20ng/mL的IL-7，分装后于-20℃保存；

(2)培养皿提前24h采用小鼠或人DLL4重组蛋白进行包被，包被浓度为10μg/ml 4℃24h或37℃4h，其中，该步骤(2)是可选的；

(3)复苏DLL4过表达的细胞株，并以1×10⁵细胞量铺设培养皿，并添加培养基到10ml；

(4)复苏细胞株，并以5×10⁵细胞量铺设培养皿，并添加培养基到10ml，养24h，其中，当实施步骤(2)时需实施该步骤(4)；

(5)将1×10⁵分选获得的造血干细胞加入培养皿的培养基中并混匀，置37℃，5％CO₂培养箱共培养；

(6)每间隔72h半量换液；

(7)并在共培养一定天数后收获细胞将细胞吹散；过70μm孔径筛网，然后采用CD25+磁珠分选或者CD44+CD25+流式抗体标记后流式分选获得DN2或DN3细胞。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的造血干细胞是将脐带血细胞红细胞裂解后，用谱系细胞耗竭试剂盒阴选后，采用流式分选人造血干细胞。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的前T系细胞为DN2细胞和/或DN3细胞。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为注射剂。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物中还包括诱导分化的试剂。

6.一种诱导造血干细胞向前T系细胞分化的试剂盒，其特征在于，包括人原代肝成纤维细胞和人造血干细胞共培养的试剂，

所述试剂盒还包括增强CXCL12-CXCR4信号通路以促进人造血干细胞向T系细胞的发育的试剂；

其中，所述的共培养在体外培养时，具体包括如下步骤：

(1)配制含15％FBS的MEMα培养基，并添加终浓度为25-50ng/mL的SCF、5-10ng/mL的Flt3L、1-20ng/mL的IL-7，分装后于-20℃保存；

(2)培养皿提前24h采用小鼠或人DLL4重组蛋白进行包被，包被浓度为10μg/ml 4℃24h或37℃4h，其中，该步骤(2)是可选的；

(3)复苏DLL4过表达的细胞株，并以1×10⁵细胞量铺设培养皿，并添加培养基到10ml；

(4)复苏细胞株，并以5×10⁵细胞量铺设培养皿，并添加培养基到10ml，养24h，其中，当实施步骤(2)时需实施该步骤(4)；

(5)将1×10⁵分选获得的造血干细胞加入培养皿的培养基中并混匀，置37℃，5％CO₂培养箱共培养；

(6)每间隔72h半量换液；

(7)并在共培养一定天数后收获细胞将细胞吹散；过70μm孔径筛网，然后采用CD25+磁珠分选或者CD44+CD25+流式抗体标记后流式分选获得DN2或DN3细胞。