[发明专利]一种诱导造血干细胞向前T系细胞分化的方法和试剂盒

说明书

本发明公开了一种诱导造血干细胞向前T系细胞分化的方法和试剂盒，属于生物医学技术领域。本发明将成纤维细胞过表达DLL4蛋白后与造血干细胞共培养，诱导造血干细胞向前T系细胞分化发育；或采用过表达DLL4蛋白的细胞与造血干细胞共培养，诱导纤维化疾病中的造血干细胞向前T系细胞分化发育。本发明诱导获得的T细胞处于胸腺发育DN2或DN3两个重要阶段。诱导的异体DN2或DN3阶段T细胞具有定植胸腺并发育成为功能完全的成熟T细胞，同时细胞数量也在异体胸腺内得到有效大量扩增，并通过异体胸腺内的发育成为具有对受体耐受的T细胞，因此成为通用型Car‑T细胞来源的基础。

技术领域

本发明涉及一种诱导造血干细胞向前T系细胞分化的方法和试剂盒，属于生物医学技术领域。

背景技术

机体免疫系统，特别是T细胞群的重建，是治疗艾滋病、肿瘤、衰老的重大临床问题之一。当前HIV-1感染所致的获得性免疫缺陷综合征(acquired immune deficiencysyndrome,AIDS)是一个重大的公共健康威胁，艾滋病往往伴随着免疫功能下降或受到抑制，进而导致一系列临床症状。在完全抑制HIV病毒繁殖和清除病毒后，CD4⁺ T细胞数量和功能逐渐恢复与重建，一直是艾滋病治疗的终极目标。目前抗逆转录病毒治疗(anti-retroviral therapy,ART)能改善患者的生活质量并延长寿命，降低了机会性感染率和早期死亡率，这种效果与病毒引起的免疫退化终止，以及其在一定程度上免疫功能的重建有关。但是该法治疗后短期内，机体免疫重建并不快，外周血CD4⁺T淋巴细胞数增加有限。此外，临床上约有16％患者在ART长期治疗后，病毒得到抑制的情况下仍不能取得良好的免疫重建，导致发生免疫重建不良现象。另一方面，感染艾滋病毒患者随着免疫功能下降，往往合并感染乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)，以及ART治疗过程中药物产生的肝毒性，所以常会导致病人严重的肝硬化和肝功能的丧失。因此，也很有必要寻找有效的治疗策略以满足这些艾滋病合并肝炎病毒感染患者的治疗。

众所周知，胸腺是T淋巴细胞发育和分化的主要场所。本质上，它可被视为一个由高度特化的胸腺上皮细胞构成的三维网络，其间充满着不同发育阶段T细胞。在上皮细胞所提供的各种信号的支持下，从骨髓迁入胸腺的造血祖细胞展开既定的发育程序，经历增殖、定向分化、TCR重排、β选择、阳性选择和阴性选择等复杂发育过程，最终形成一个具有高度多样性，并能有效区分“自我”与“非我”的T细胞库。T细胞在胸腺内的发育是一个高度有序的、多阶段、极为复杂的过程，不同的发育阶段有赖于胸腺微环境所提供的各异的信号。附图1是细胞胸腺发育的流程示意图，淋巴前体细胞(Common lymphoid progenitor,CLP)由骨髓迁入胸腺，遵从一定的发育程序向成熟T细胞分化。根据CD4和CD8表达如否，胸腺T细胞发育分为三个主要阶段，即双阴性(Double Negative,DN)、双阳性(Double Positve,DP)和单阳性(Single Positive,SP)阶段。基于CD117、CD44及CD25表达情况，DN细胞又分作DN1～DN4四群，分别代表不同发育阶段。