[发明专利]一种基于流式细胞术的HLA-B27快速检测方法

说明书

本发明提供了一种基于流式细胞术的HLA‑B27快速检测方法，步骤包括：将25μL外周血样本与15μL HLA‑B27‑FIT/CD3‑PE抗体共孵育，加入溶血素，静置后离心去上清，加入流式鞘液，离心去上清，洗涤后加入多聚甲醛溶液混匀后上流式细胞仪进行检测，检测时将所要收集的细胞设定为2000个。本发明通过集约式富集的方法，并对流式软件的检测程序作进一步优化，降低试剂用量，大大减少了标本用量与检测时间，掌握了HLA‑B27快速检测技术，建立了快速化、集约化的HLA‑B27检测平台。

技术领域

本发明属于免疫学检测技术领域，具体涉及一种基于流式细胞术的HLA-B27快速检测方法。

背景技术

HLA(human leucocyte antigen)-B27属于主要组织相容性复合(majorhistocompatibility complex MHC)I型分子,它是由重链和微球蛋白以及组装在内质网上的抗原肽组成，表达于所有的真核细胞表面，研究表明：淋巴细胞中高表达的HLA-B27参与多种疾病的发生过程。强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis AS)是一种以胸、颈、腰段的脊柱韧带和关节以及骶髂关节等部位炎症引起的疼痛为特征的炎症性的自身免疫性疾病，它多发生于青年和中年人群中的一种疾病，起病隐袭，病程较长，容易造成患者不可逆的脊柱关节受损，在发病的早期难以精准的诊断。目前临床上对强直性脊柱炎的诊断主要是通过计算机断层扫描(computer tomography CT)，但是这种诊断具有滞后性，即患者从发生症状到临床确诊往往会滞后三到五年，延误了疾病的治疗。研究发现，强直性脊柱炎的发生与HLA-B27的异常表达有着密切的关系，因此，HLA-B27的检测在强直性脊柱炎的早期诊断中具有重要的意义，是临床诊断和鉴别诊断强直性脊柱炎的重要参考指标。

目前公司采用的HLA-B27的检测方法为流式细胞法，所使用的试剂为美国BD公司开发的试剂盒，在实际检测过程中，至少需要对50μL样本量进行检测，与足够量的抗体结合后上机检测以保证检测结果的准确度，常规方法的检测成本为60元/人份，成本较高，也有部分研究人员出于减少检测成本的目的减少抗体添加量，但往往会造成总符合率的明显降低而不能得到实际应用。目前的检测方法难以适应当今激烈的市场竞争环境，急需改进检测方法，降低检测成本。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提供一种基于流式细胞术的HLA-B27快速检测方法，解决了现有HLA-B27流式细胞术检测方法成本过高、检测效率不高的问题。

本发明提供了一种基于流式细胞术的HLA-B27快速检测方法，步骤包括：将25～30μL外周血样本与15～18μL HLA-B27-FIT/CD3-PE抗体共孵育，加入溶血素，静置后离心去上清，加入流式鞘液，离心去上清，洗涤后加入多聚甲醛溶液混匀后按仪器操作规程进行上机检测，检测时将所要收集的细胞设定为2000～2500个。

优选的，在上述基于流式细胞术的HLA-B27快速检测方法中，所述洗涤为采用流式鞘液洗涤一次。

更加优选的，在上述基于流式细胞术的HLA-B27快速检测方法中，所述上机检测过程中，前期采用中速收集细胞，后期采用高速收集细胞。具体的，所述前期指前1000个细胞的收集，后期指1000个以后细胞的收集。所述中速指选择流式细胞仪上中速(MED)收集速度档位，所述高速指选择流式细胞仪上高速(HI)收集速度档位。

优选的，在上述基于流式细胞术的HLA-B27快速检测方法中，所述上机检测的检测时长为20～30s。

优选的，在上述基于流式细胞术的HLA-B27快速检测方法中，所述共孵育条件为：室温下避光静置孵育13-17min。

优选的，在上述基于流式细胞术的HLA-B27快速检测方法中，所述溶血素为1×HLA-B27BD FACS溶血素，溶血素加入量为1.5-2.5mL，加入溶血素后静置8-12min。