[发明专利]多种脂溶性维生素的含量测定方法

权利要求书

1.一种多种脂溶性维生素的含量测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）标准溶液的制备：

分别精密称量5种脂溶性维生素，用50%甲醇水稀释，得到5种维生素的储备液，浓度均为10μg/mL，然后将储备液逐级稀释得到5种脂溶性维生素的标准工作溶液；

用甲醇溶解内标化合物，得到内标维生素A-d₈，25-羟基维生素D₂-d₆，25-羟基维生素D₃-d₆，维生素E-d₆，维生素K₁-d₇的储备液浓度分别为50μg/mL、20μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、5μg/mL，然后将内标储备液用甲醇稀释得到内标工作溶液；

（2）标准曲线的制备

取步骤（1）制备的标准工作溶液100μL，加入200μL的内标工作溶液，涡旋混合1min，加入萃取液1000uL，涡旋混合3min，12000rpm离心10min，取上清液800uL置洁净离心管内，室温氮气吹干，再加入100μL 50%乙腈水溶液复溶，得到脂溶性维生素的校正标样；将校正标样进行液相质谱分析，以待测物/内标峰面积比对待测物浓度进行线性回归，得到标准曲线；

（3）待测血清样本的制备：

精密吸取血清样品100μL置于洁净的离心管中，加入200μL内标工作溶液，涡旋混合1min，加入萃取液1000uL，涡旋混合3min，12000rpm离心10min，取上清液800uL置洁净离心管内，室温氮气吹干，加入100μL 50%乙腈水溶液复溶，得到待测血清样本；

（4）待测血清样本检测：

将步骤（3）制备的待测血清样本进行液相质谱检测，检测结果代入步骤（2）所得标准曲线，可以回算出血清样本中脂溶性维生素的浓度。

2.根据权利要求1所述的多种脂溶性维生素的含量测定方法，其特征在于：所述5种脂溶性维生素分别为维生素A、25羟基维生素D₂、25羟基维生素D₃、维生素E和维生素K₁。

3.根据权利要求1所述的多种脂溶性维生素的含量测定方法，其特征在于：所述步骤（1）中5种脂溶性维生素工作液的浓度范围分别为维生素A：20-1000ng/mL；25羟基维生素D₂：2-100ng/mL；25羟基维生素D₃：2-100ng/mL；维生素E:200-10000ng/mL；维生素K₁:0.2-10ng/mL。

4.根据权利要求1所述的多种脂溶性维生素的含量测定方法，其特征在于：所述脂溶性维生素萃取液为乙酸乙酯、正己烷或叔丁基甲基醚，优选为正己烷。

5.根据权利要求1所述的多种脂溶性维生素的含量测定方法，其特征在于：所述色谱检测条件为：色谱柱：Waters C18（2.1*100mm，2.5μm）色谱柱，流动相A相为0.1%甲酸水溶液，B相为2mmol/L甲酸铵的水溶液，流速为0.2-0.4mL/min，柱温40℃-50℃，进样体积10uL。