[发明专利]多种脂溶性维生素的含量测定方法

说明书

本发明公开了多种脂溶性维生素的含量测定方法，通过液相质谱法检测血清样本，带入标准曲线得到血清样本中的多种脂溶性维生素的含量。对比现有检测方法，本发明的方法具有多种物质同时检测、高灵敏度、高选择性、可定性、可定量、步骤简单、适用范围广、快速准确的特点。

技术领域

本发明涉及维生素的含量测定方法，具体涉及多种脂溶性维生素的含量测定方法。

背景技术

脂溶性维生素（water-soluble vitamins）是一种含有环结构和长脂肪族烃链的一组维生素，主要包括维生素A、D、E、K。

维生素A具有调节表皮及角质层新陈代谢的功效，可以抗衰老，去皱纹，能减少皮脂溢出而使皮肤有弹性，同时淡化斑点，柔润肌肤；有助于保护表皮、黏膜不受细菌侵害，预防皮肤癌，预防夜盲症、视力衰退，治疗眼疾，使女人明眸善昧；还可以促进骨骼生长，帮助牙齿生长、再生，有效预防肥胖，保持女性苗条的身材，可有助于防治脱发。

维生素D（Vitamin D）为固醇类衍生物，具抗佝偻病作用，又称抗佝偻病维生素。维生素D是一种脂溶性维生素，对健康关系较密切的是VD₂和VD₃，维生素D维持血清钙磷浓度的稳定，血钙浓度低时，诱导甲状旁腺素分泌，将其释放至肾及骨细胞。维生素D促进怀孕及哺乳期输送钙到子体1位羧基化酶除受血清中钙磷浓度及膳食中钙磷供给量的影响外，还受激素的影响，停经后的妇女VD₃浓度减低，易有骨质软化等症状。VD₃对小肠作用为诱导合成cabp.1，与小肠细胞的受体形成复合体进入细胞核染色体上，促使cabp的信使rna(mrna)的合成，此mrna在胞浆内转录为cabp。骨的矿物化作用的机理尚未阐明，在现阶段中只了解到维生素D促进钙磷的吸收，又可将钙磷从骨中动员出来，使血浆钙、磷达到正常值，促使骨的矿物化，并不断更新。

维生素E能促进生殖。它能促进性激素分泌，使男子精子活力和数量增加；使女子雌性激素浓度增高，提高生育能力，预防流产。维生素E缺乏时会出现睾丸萎缩和上皮细胞变性，孕育异常，在临床上常用维生素E治疗先兆流产和习惯性流产。

目前，已经报道的脂溶性维生素检测方法有微生物法、分光光度法、荧光法、色谱法、液相-质谱联用等。但上述检测方法仍存在检测周期长，操作复杂，偶然因素多，具有不能同时测定几种维生素的局限性。

发明内容

为弥补现有技术的不足，本发明提供一种选择性高、可准确定量血清中的多种脂溶性维生素含量的测定方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：一种多种脂溶性维生素的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）标准溶液的制备：

分别精密称量5种脂溶性维生素，用50%甲醇水稀释，得到5种维生素的储备液，浓度均为10μg/mL，然后将储备液逐级稀释得到5种脂溶性维生素的标准工作溶液；

用甲醇溶解内标化合物，得到内标维生素A-d₈，25-羟基维生素D₂-d₆，25-羟基维生素D₃-d₆，维生素E-d₆，维生素K₁-d₇的储备液浓度分别为50μg/mL、20μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、5μg/mL，然后将内标储备液用甲醇稀释得到内标工作溶液；

（2）标准曲线的制备