[发明专利]一种强效抑藻活性物质的提取方法及其应用

权利要求书

1.一种强效抑藻活性物质的提取方法，其特征在于具体步骤为：

步骤S1：取铜绿微囊藻水华现场的表层样品溶解于高压灭菌的液体LB培养基中，置于150～200rpm的摇床中震荡20～30min使得样品均匀分散；10倍稀释法涂布均匀分散的样品于LB固体平板，于28～37℃培养3～5d；挑取不同类型单菌落划线于LB固体平板，于28～30℃培养3～5d，重复该步骤直至得到纯培养；接种分离出的纯培养物单菌落于4mL的液体LB培养基，置于28～37℃摇床，180～250rpm震荡培养3～5d；将1mL发酵液加入到20mL指数期铜绿微囊藻培养液中，于20±1℃，12h光照，12h黑暗，50μmol photons m^-2s^-1光照强度条件下培养2d，观察铜绿微囊藻细胞生长状况，从而筛选出抑藻活性菌株，将抑藻活性菌株于-80℃保藏，待用；

步骤S2：将抑藻活性菌株接种于液体LB培养基中，培养至对数生长期；将培养至对数生长期的细菌发酵液离心后得到无菌上清液，向无菌上清液中加入乙酸乙酯并将乙酸乙酯与无菌上清液充分混匀萃取，将乙酸乙酯萃取液旋干后得到强效抑藻活性物质，该强效抑藻活性物质用于抑制铜绿微囊藻细胞生长；

所述液体LB培养基的组成为胰蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L和氯化钠10g/L，pH＝7.2。

2.根据权利要求1所述的方法提取得到的强效抑藻活性物质在制备抑藻制剂中的应用，其特征在于具体过程为：将6mg抑藻活性物质与1g壳聚糖混合后添加100mL蒸馏水制备成混合液A；将3.0g海藻酸钠加入到60mL蒸馏水中并用微波炉加热，每加热20s用玻璃杯进行搅拌并捶打固体颗粒，最终形成没有明显颗粒物的乳胶状体系B；将0.75g阿拉伯胶溶解于25mL蒸馏水中乳化5min得到混合液C；将混合液A、乳胶状体系B和混合液C混合搅拌均匀，并在超声清洗机中清除混合体系中的气泡直至完全清除气泡为止；将超声清除气泡的混合体系在恒流泵的蠕动作用下滴入3.0wt％的氯化钙水溶液中形成含有抑藻活性物质的凝胶小球，将凝胶小球置于电热恒温干燥箱中干燥2～4h后置于风口处待小球完全干燥，期间不断拨动小球以防止小球之间相互粘连，最终制得对铜绿微囊藻细胞生长具有抑制效果的抑藻制剂。