[发明专利]一种食品脂质提取及检测食品脂质的方法

权利要求书

1.一种食品脂质提取方法，其特征在于：包括将食品样品与混合内标混合，然后与脂质提取溶剂和超纯水进行多次混合以及多次离心，合并多次离心后所得上层相包含神经节苷脂，合并多次离心后所得下层有机相包含磷脂和甘油酯、脂肪酸；其中，所述食品为母乳，所述脂质为神经节苷脂、磷脂、甘油酯和脂肪酸；

与脂质提取溶剂和超纯水进行多次混合以及多次离心，合并多次离心后所得上层相包含神经节苷脂，合并多次离心后所得下层有机相包含磷脂和甘油酯、脂肪酸的步骤包括以下步骤：

1#管：200μL母乳、200μL超纯水、1.8mL甲醇、800μL二氯甲烷手动摇匀震荡10s，超声5min，加入200μL超纯水和800μL二氯甲烷，手动摇匀震荡10s，离心，6000r/min 15min，取出下层有机相到2#管；

1#管上层加1.6mL二氯甲烷，离心，6000r/min 15min，取出下层有机相到3#管；

2#管下层有机相、1mL超纯水、2.2mL甲醇、0.6mL二氯甲烷，手动摇匀，离心，3000g/min10min，取出下层有机相到3#管混合，氮气吹干，溶解到1ml二氯甲烷：甲醇＝2:1中，用于固相萃取分离甘油酯、脂肪酸和磷脂：

活化硅胶柱：用3mL正己烷活化硅胶柱，弃去洗脱液，然后将复溶后的脂质溶液倒入柱子中；

洗脱非极性脂：首先向柱子中加入3mL的正己烷/二乙醚8:2溶液，收集洗脱液，然后加入3mL正己烷/二乙醚1:1溶液，收集洗脱液；氮吹干后，2mL复溶液复溶，取出100μL，加入900μL复溶液，6000r/min，5min离心后，取上清上机检测甘油酯和游离脂肪酸；

洗脱磷脂：向柱子中加入4mL的甲醇，然后加入2mL甲醇和2mL二氯甲烷/甲醇/水3:5:2，收集洗脱液，氮气吹干后，加入200μL复溶液，6000r/min，5min离心后，取上清上机检测磷脂；

取出1#管上层相与2#管上层混合，氮气吹干后，用80％的甲醇200μL复溶，6000r/min，5min离心后，取上清上机检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述混合内标为氘代甘油酯、不同种类氘代磷脂、不同种类氘代鞘脂中的一种或多种；

所述混合内标的量由如下方法确定得到：混合内标加入后的各脂质的质量浓度为原样品中同种类脂质的质量浓度的60-140％。

3.一种检测食品脂质的方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)磷脂/甘油酯/脂肪酸检测：取权利要求1-2中任一项方法提取得到的所述甘油酯、脂肪酸和磷脂，将其稀释至脂质可定量检测的上限和下限之间，采用LC-Q-TOF-MS AB Sciex6600在如下条件中进行检测：色谱柱为：购自Phenomenex,Torrance,CA,USA的Kinetex C18柱，规格为150mm×4.6mm,2.6μm；或者购自Phenomenex,Torrance,CA,USA的Kinetex C18柱，规格为50mm×3mm,2.6μm；柱温为30-50℃；流动相A为5nmol/L的乙酸铵溶液，乙酸铵溶液的溶剂为体积比为1：1：1的甲醇、乙腈、水，流动相B为5nmol/L的乙酸铵的异丙醇溶液，流速0.3-0.8mL/min，进样量1-3μL，进行梯度洗脱；

所述磷脂/甘油酯/脂肪酸的检测按如下表进行洗脱梯度：

2)神经节苷脂的检测：取权利要求1-2中任一项方法提取得到的所述神经节苷脂，将其稀释至脂质可定量检测的上限和下限之间，采用LC-Q-TOF-MS AB Sciex6600在如下条件中进行检测：色谱柱：购自Waters的BEH C18，规格为100×2.1mm，1.7um；柱温为30-50℃；流动相A为90ml水+10ml甲醇+0.1ml 1mol/L的乙酸铵，流动相B为100ml甲醇+0.1ml 1mol/L的乙酸铵，流速0.3mL/min，进样量为10μL，进行梯度洗脱；

所述检测神经节苷脂的方法按如下表进行洗脱梯度：

所述食品为母乳。