[发明专利]针对人鼠共患病病原微生物的PCR引物对、试剂盒及其用途

权利要求书

1.一种针对人鼠共患病病原微生物的PCR引物对，所述PCR引物对由针对恙虫病东方体的引物对、针对莫氏立克次体的引物对、针对嗜吞噬细胞无形体的引物对、针对土拉弗朗西斯菌的引物对、针对贝氏柯科斯体的引物对、针对问号钩端螺旋体的引物对和针对巴尔通体的引物对组成；

所述针对恙虫病东方体的引物对的特异性碱基序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示；

所述针对莫氏立克次体的引物对的特异性碱基序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4所示；

所述针对嗜吞噬细胞无形体的引物对的特异性碱基序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6所示；

所述针对土拉弗朗西斯菌的引物对的特异性碱基序列分别如SEQ ID NO.7和SEQ IDNO.8所示；

所述针对贝氏柯科斯体的引物对是针对的特异性碱基序列分别如SEQ ID NO.9和SEQID NO.10所示；

所述针对问号钩端螺旋体的引物对的特异性碱基序列分别如SEQ ID NO.11和SEQ IDNO.12所示；

所述针对巴尔通体的引物对的特异性碱基序列分别如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示。

2.如权利要求1所述的PCR引物对，其特征在于：

所述PCR引物对的每一对中的一条上游共价连接有相同的上游通用引物部分，形成上游嵌合引物；所述PCR引物对的每一对中的另一条上游共价连接有相同的下游通用引物部分，形成下游嵌合引物。

3.如权利要求2所述的PCR引物对，其特征在于：

所述上游通用引物部分的碱基序列如SEQ ID NO.15所示；所述下游通用引物部分的碱基序列如SEQ ID NO.16所示。

4.一种试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1-3中任一项所述的PCR引物对。

5.如权利要求1-3中任一项所述的PCR引物对在制备针对人鼠共患病病原微生物的检测制剂中的用途。

6.一种用于非诊断目的的人鼠共患病病原微生物的检测方法，所述方法包括如下步骤：

S1：提取待测样本的DNA，得到待测模板；

S2：使用如权利要求1-3中任一项所述的PCR引物对对所述待测模板进行PCR反应，得到PCR产物；

S3：对所述PCR产物进行表征，获得检测信息。

7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于：

在所述步骤S2中，使用如权利要求1-3中任一项所述的PCR引物对、上游通用引物和下游通用引物进行PCR反应，其中，所述上游通用引物与所述上游通用引物部分或其5’部分相同；所述下游通用引物与所述下游通用引物部分或其5’部分相同；

所述PCR反应分三个阶段进行：

第一阶段：退火温度为55℃-62℃；

第二阶段：退火温度为66℃-72℃；

第三阶段：退火温度为43℃-49℃。

8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于：

在所述步骤S2中，如权利要求1-3中任一项所述的PCR引物对中的任一条引物的浓度为30-60nmol/L。

9.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于：

在所述步骤S2中，所述上游通用引物的浓度350-450nmol/L；所述下游通用引物的浓度350-450nmol/L。

10.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于：

在所述步骤S2中，所述PCR反应的热循环为：

95℃5min；

95℃30s，55℃-59℃90s，72℃60s，循环10次；

95℃30s，66.5℃-71.5℃90s，72℃60s，循环10次；

95℃30s，43.5℃-48.5℃90s，72℃60s，循环20次；

72℃10min。