[发明专利]针对人鼠共患病病原微生物的PCR引物对、试剂盒及其用途

说明书

本发明公开了一种针对人鼠共患病病原微生物的PCR引物对，分别用于扩增问号钩端螺旋体、莫氏立克次体、恙虫病东方体、嗜吞噬细胞无形体、土拉弗朗西斯菌、贝氏柯科斯体和巴尔通体的特异性基因。使用该PCR引物对，根据TSP原理建立起了高敏感性和特异性地单独或组合检测如上七种病原体的方法。

技术领域

本发明属于微生物学领域，特别涉及七种鼠传病病原微生物的多重PCR检测方法及其试剂与应用。

背景技术

鼠传疾病是指由鼠类引起的、在人与人/动物之间传播的人兽共患传染病，也称人鼠共患病。鼠类能将某些病毒、细菌、立克次体、原虫和蠕虫等病原体传播给人类和家畜，是多种人畜共患病病原体的储存宿主。近年来，随着全球化进程加快，人类活动增强，人和物的流动性增强，鼠传疾病流行区域也不断扩大，多种新发鼠传疾病出现还有部分老传染病复燃^[1-3]，如问号钩端螺旋体(Leptospira interrogans，Lep)引起的钩体病和莫氏立克次体(Rickettsiae typhi，Rt)引起的地方性斑疹伤寒是我国法定传染病，多年来一直困扰我国人民的身体健康，由恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi，Ot)、嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum，Ap)、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis，Ft)、贝氏柯科斯体(Coxiella burnetii，Cb)和巴尔通体(Bartonella，Bar)引起的传染病是近年来新发和重复复燃的传染病，传播速度快，散播面积广，危害性大，其中Cb引发的疫区遍布全球，成为分布最广的人兽共患病之一^[4]，所引起的疫情造成巨大的卫生经济负担，使得鼠传疾病的防控工作面临挑战。

及时准确地检测病原体是预防控制鼠传疾病的关键步骤之一，为进一步制定防控策略和持续监测提供基础。传统检测方法如分离培养、血清学检测法等操作通量小、灵敏度较低，以核酸分子检测技术为基础的各种高通量检测方法应运而生，如蔡婧等^[5]用多重实时荧光探针法实现对3种致病型伯氏疏螺旋体分型检测，通过设计1对通用引物和3条特异探针完成检测，最低检测极限可达5copies/μl，但该方法因检测通道数有限限制了被检病原种类数；Jana等^[6]建立了一种将DNA微阵列与PCR技术结合检测蜱传病原体的方法，基于16S可变区同时检测贝氏柯科斯体、立克次体和土拉弗朗西斯菌，检测极限分别是10copies/μl，100copies/μl，1copies/μl，该方法操作复杂且费用昂贵。

参考文献

[1]余向华,张孝和,倪庆翔,等.鼠传疾病流行病学研究进展[J].中国媒介生物学及控制杂志,2015,26(06):634-636.

[2]Bordes F,Blasdell K,Morand S.Transmission ecology of rodent-bornediseases:New frontiers[J].Integr Zool,2015,10(5):424-435.

[3]Liu Q,Xu W,Lu S,et al.Landscape of emerging and re-emerginginfectious diseases in China:impact of ecology,climate,and behavior[J].FrontMed,2018,12(1):3-22.

[4]贾广乐,王晓楠,廖娟红,等.Q热贝纳柯克斯体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立[J].中国畜牧兽医,2013,40(7):18-21.

[5]蔡婧.伯氏疏螺旋体分型多重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用[D].河北:承德医学院病原生物学,2015.