[发明专利]促进牛体外胚胎培养受精卵发育的方法

说明书

本发明涉及促进牛体外胚胎培养受精卵发育的方法。一方面，本发明提供了一种胚胎培养液，其包含氯化钠、氯化钾等物质。另一方面，提供了牛体外受精胚胎培养的方法，包括步骤：(1)卵母细胞的采集和体外成熟；(2)体外受精；(3)胚胎体外培养及保存，受精卵在本发明胚胎培养液中培养后冷冻保存。本发明方法呈现优异技术效果，例如能够大大提高受精卵发育程度。

技术领域

本发明属于动物繁殖技术领域，涉及一种用于农业-畜牧兽医繁殖的技术，具体涉及一种牛体外受精胚胎培养的方法，另外，本发明还涉及牛体外受精胚胎培养的相关培养液在牛体外受精胚胎培养中的应用。进一步的，本发明还涉及使用该牛体外受精胚胎培养的相关培养液进行牛体外受精胚胎培养的方法。特别是，本发明牛体外受精胚胎培养的方法具有优异的技术效果，例如能够以低成本的方法获得较高的培养效率。特别是，本发明涉及一种从牛进行活体或离采集体卵母细胞进而进行体外受精以及胚胎培养的方法。更特别是，本发明涉及一种在牛体外胚胎培养过程中促进卵母细胞体外成熟的方法，和/或涉及一种在牛体外胚胎培养过程中促进受精卵发育的方法。

背景技术

体外受精(In Vitro Fertilization)或(external fertilization)是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术，英文简称为IVF。由于它与胚胎移植技术(ET)密不可分，又简称为IVF-ET。在生物学中，把体外受精胚胎移植到母体后获得的动物称试管动物(test-tube animal)。这项技术成功于20世纪50年代，在最近20年发展迅速，现已日趋成熟而成为一项重要而常规的动物繁殖生物技术。

体外胚胎生产(IVP)技术，尤其是例如活体采卵-体外胚胎生产(OPU-IVP)技术，是通过活体采集优秀个体卵母细胞，经体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)、胚胎体外培养(IVC)等，在体外条件下可快速获得大量优质胚胎。相比体内胚胎，其生产效率高达4～8倍(Blondin P.Logistics of large scale commercial IVF embryo production.ReprodFertil Dev.2016 Jan；29(1):32-36)，能有效提升优良母畜繁殖潜力。目前，国外牛OPU-IVP技术已达到较高水平(Merton JS,de Roos AP,Koenen EP,Roelen BA,Vos PL,Mullaart E,Knijn HM.Bovine OPU-derived oocytes can be matured in vitro for16-28h with similar developmental capacity.Reprod Domest Anim.2012 Dec；47(6):1037-42；Oliveira LH,Sanches CP,Seddon AS,Veras MB,Lima FA,Monteiro PLJ Jr,Wiltbank MC,Sartori R.Short communication:Follicle superstimulation beforeovum pick-up for in vitro embryo production in Holstein cows.J Dairy Sci.2016Nov；99(11):9307-9312；Cavalieri FLB,Morotti F,Seneda MM,Colombo AHB,AndreazziMA,Emanuelli IP,Rigolon LP.Improvement of bovine in vitro embryo productionby ovarian follicular wave synchronization prior to ovum pick-up.Theriogenology.2018 Sep 1；117:57-60)，部分地区已实现商业化应用。但我国在该技术领域仍存在效率较低等不足，限制了其使用。