[发明专利]盐胁迫下碱蓬稳定表达的内参基因筛选方法

权利要求书

1.盐胁迫下碱蓬稳定表达的内参基因筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)初步筛选14个稳定的候选内参基因，其基因名分别为：ACT7、ACT11、CCD1、TUA5、UPL1、UBC28、EF1α、PP2A、DREB1D、TIM、V-H⁺-ATPase、MPK6、PHT4；5、CESA1；针对候选基因，设计相应扩增引物；

2)提取不同盐浓度处理的碱蓬总RNA，并测定其浓度，获得的不同盐浓度处理碱蓬总RNA反转录成cDNA，并以上述获得的所有样品cDNA等核酸量混合后的总cDNA和碱蓬gDNA做为扩增模板，并利用PCR检测引物的特异性；

3)以不同盐浓度处理的碱蓬cDNA为模板，对11个候选内参基因在qRT-PCR仪器上进行反应，上述11个候选内参基因名分别为：ACT7、ACT11、CCD1、TUA5、UPL1、PP2A、DREB1D、V-H⁺-ATPase、MPK6、PHT4；5、CESA1；测量方法为荧光定量PCR反应法；

4)利用荧光定量PCR反应后得到的Ct值，对各候选内参基因进行稳定性分析；

5)通过geNorm确定准确定量的最优内参基因数目，以0.15为阈值，通过标准化因子配对差异分析Vn/n+1值来判定内参基因的最合适数目；

6)对碱蓬CESA基因表达量变化进行计算，以10个基因做为内参基因，对目的基因CESA在不同盐浓度处理条件下表达量的变化进行计算，上述10个内参基因为ACT7、ACT11、CCD1、TUA5、UPL1、PP2A、DREB1D、V-H⁺-ATPase、MPK6、PHT4；5。

2.根据权利要求1所述的盐胁迫下碱蓬稳定表达的内参基因筛选方法，其特征在于，所述步骤4)中采用GeNorm、Bestkeeper和Normfinder软件对各候选内参基因进行稳定性分析，并确定内参基因的Ct值，在15-25之间。