[发明专利]带荧光标记的人源细胞角蛋白混合抗体及其制备方法

说明书

本发明提供了一种带荧光标记的人源细胞角蛋白混合抗体及其制备方法，所述的带荧光标记的人源细胞角蛋白混合抗体包括CK7、CK18、CK19三种抗体，三种抗体的比例为：CK7：CK18：CK19＝X:Y:Z，其中，X＝1、2、3、4或5；Y＝1、2、3或4；Z＝3、4、5、6、7或8。本发明的混合抗体应用于循环肿瘤细胞(CTC)检测方面，具有良好的稳定性，而且癌种适用范围广泛。

技术领域

本发明是关于一种带荧光标记的人源细胞角蛋白混合抗体及其制备方法，具体地说，是一种带荧光标记的人源细胞角蛋白混合抗体(CK7+18+19)、其制备方法以及在循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell，CTC)检测方面的应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

癌症一直是威胁人类健康的重大疾病之一。恶性肿瘤最显著的特征是侵袭与转移，由于自发或因诊疗操作导致肿瘤细胞从原发肿瘤脱落，发生上皮-间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition，EMT)，从而使肿瘤细胞具有流动特性，并进入到外周血中，就形成了CTC。因此在外周血中检测到CTC预示着肿瘤有可能发生转移。另外，美国哈佛医学院的研究表明，原位肿瘤组织可以吸引CTC再次浸润到原发肿瘤上，促进肿瘤的生长(可参考K.Pantel等人，Nat.Rev.Clin.Oncol.2009,6,339-351；J.Kaiser等人，Science2010，327,1072-1074)。因此，高效准确地检测外周血CTC对于研究肿瘤转移机制具有指导意义，且对肿瘤患者的耐药评估、疗效评估、预后判断、复发转移监测具有重要意义。

CTC在血液中的含量非常少，大约每毫升血中只有几个。自1869年澳大利亚医生Thomas Ashworth首次发现CTC至今，两个世纪以来CTC的研究一直被分离技术所局限。近年来，CTC的检测技术发展出机械法和免疫分离法这两类CTC富集检测方法，CTC的生物学意义和临床价值重新受到关注。其中，免疫分离法主要是利用CTC表面的一些特异性标志物，如上皮细胞粘附因子(EpCAM)、肿瘤胚胎抗原(Carcino Embryonic Antigene，CEA)和人表皮生长因子受体2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2，HER2)等，通过抗原抗体特异性结合反应实现CTC与血液中其他细胞的分离(可参考H.Xu等人，Biomaterials 2011，32,9758-9765；S.L.Stott等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA2010，107,18392-18397；S.Nagrath等人，Nature 2007，450,1235-1239；A.-E.Saliba等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2010，107,14524-14529；X.Wang等人，Cancer Res.2011，71,1526-1532)。机械分离方法在CTC富集和分离中，其特异性和灵敏度均低于免疫分离方法。因此人们不断改进免疫分离技术，试图提高分离效率。

第一种被FDA批准用于检测CTC的是强生公司的CellSearch试剂盒。其检测原理是通过在磁珠上包被抗-EpCAM抗体识别和富集上皮组织来源的肿瘤细胞，再利用带荧光标记的抗-CKs抗体识别上皮标记物人源细胞角蛋白(Cytokeratins，CKs)的方法来鉴别CTC。CellSearch在临床上被用来做肿瘤预后评估，并在2004年被美国FDA批准作为乳腺癌转移的预后诊断方法。

在这些免疫分析中，上皮细胞粘附因子(EpCAM)和CKs是循环肿瘤细胞(CTC)检测的常用表面标志物。然而，由于抗体生产成本及生产技术的限制，导致市场上的抗-CKs抗体多为单一的某种抗体，单一抗体适用的癌种范围有限，而市场上仅有的少数几种带荧光标记的混合抗体的适用范围也无法覆盖大部分癌种且抗体上偶联的荧光基团稳定性较差，因此找到一种适用癌种广泛且荧光基团稳定的带荧光标记的人源细胞角蛋白混合抗体具有重要意义。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种带荧光标记的人源细胞角蛋白混合抗体。