[发明专利]琥珀酰丙酮的检测方法

说明书

本发明提供了一种琥珀酰丙酮的检测方法，包括以下步骤：获取干血斑样本；净化预处理：向所述干血斑样本中加入有机溶剂，静置后去除有机溶剂，得净化后的干血斑样本；目标试样提取：采用提取工作液对所述净化后的干血斑样本进行提取，即得目标试样；所述提取工作液中包含有萃取剂、衍生化试剂和酸性物质；采用串联质谱法检测目标试样。该检测方法有助于提高串联质谱检测干血斑琥珀酰丙酮的灵敏度，操作简单、快速，对样本的净化预处理还可更好的保护仪器，明显降低仪器的维护成本。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种琥珀酰丙酮的检测方法。

背景技术

目前，传统方法中主要通过串联质谱技术检测尿液或血液中的琥珀酰丙酮(Succinylacetone，SUAC)，主要包括：①使用GC-MS(气相色谱串联质谱)检测尿液中的琥珀酰丙酮，该方法需要检测尿液中肌酐含量，并对待测物进行肟化反应、液液萃取、衍生化反应等一系列繁琐的操作，前处理耗时较长，且尿液样本容易长菌，不利于长期保存及运输。②使用LC-MS/MS(液相色谱串联质谱)联合检测干血斑中氨基酸、肉碱、琥珀酰丙酮衍生法，先提取血斑中氨基酸、肉碱后进行衍生化，再对残留血斑进行琥珀酰丙酮的提取，最后将两者所得处理液吹干，再使用复溶液将两者重组在一起上机，操作繁琐，耗时较长，经多次的转移、混合可能存在转移错误的风险。③使用LC-MS/MS(液相色谱串联质谱)联合检测干血斑中氨基酸、肉碱、琥珀酰丙酮非衍生法，先提取血斑中氨基酸、肉碱，再对残留血斑进行琥珀酰丙酮的提取，最后将两者所得处理液吹干，再使用复溶液将两者混合在一起上机，操作繁琐，经多次的转移、混合可能存在转移错误的风险。④使用LC-MS/MS(液相色谱串联质谱)检测干血斑中琥珀酰丙酮非衍生法(一步法)，使用萃取液直接萃取干血斑中的琥珀酰丙酮后，将部分萃取液转移至另一容器中进行稀释后上机，操作简单，但样本中杂质含量较高，对信号存在抑制作用，容易导致检测设备堵塞，增加设备维护频率和成本，需对样本进行稀释，降低样本的灵敏度。

可见，传统的检测干血斑琥珀酰丙酮的方法存在的操作繁琐、耗时、基质复杂、灵敏度低、设备维护成本高、手动转移出错风险高等问题。因此，有必要提供一种操作简单、快速、低成本的，且灵敏度高的检测琥珀酰丙酮的方法。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种操作简单、快速、低成本的，且灵敏度高的琥珀酰丙酮的检测方法。

为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：

一种琥珀酰丙酮的检测方法，包括以下步骤：

获取干血斑样本；

净化预处理：向所述干血斑样本中加入有机溶剂，静置后去除有机溶剂，得净化后的干血斑样本；

目标试样提取：采用提取工作液对所述净化后的干血斑样本进行提取，即得目标试样；所述提取工作液中包含有萃取剂、衍生化试剂和酸性物质；

采用液相色谱串联质谱法检测目标试样。

在其中一些实施例中，所述净化预处理中，所述有机溶剂为C1-C3一元醇。

在其中一些实施例中，所述净化预处理中，所述有机溶剂为甲醇。

在其中一些实施例中，所述净化预处理中，向所述干血斑样本中加入干血斑样本30～50倍体积的有机溶剂，静置10～20min后去除有机溶剂，得净化后的干血斑样本。

在其中一些实施例中，所述目标试样提取，步骤包括：向净化后的干血斑样本中加入提取工作液，在37-45℃温度下反应40-80分钟；

所述提取工作液中包含有萃取剂、衍生化试剂和酸性物质。

在其中一些实施例中，所述萃取剂为：乙腈与水的混合溶液；和/或

所述衍生化试剂为水合肼；和/或