[发明专利]CdSe/CdS量子点共振光散射法测定DNA含量的方法

说明书

本发明公开了一种CdSe/CdS量子点共振光散射法测定DNA含量的方法，其基于CdSe/CdS量子点共振瑞利散射法（Resonance Rayleigh Scattering,RRS）测定DNA含量，取CdSe/CdS量子点配制成1.5×10‑3mol/L的溶液，再与以脱氧核糖核酸样品及PBS缓冲液混合；用荧光分光光度计，扫描范围为250~800nm条件下各供试液的荧光光谱，并根据荧光强度变化与DNA浓度的线性关系绘制标准工作曲线；以取待检测液检测的ΔIRRS；再根据标准工作曲线获得待检测液中的DNA浓度。该方法可简单、快速、准确测定样品的DNA含量，以应用于DNA的定量分析等方面。

技术领域

本发明涉及DNA检测方法，具体涉及一种CdSe/CdS量子点对DNA检测方法，属于生化分析技术领域。

背景技术

量子点属于零维纳米材料，因其独特的物理和化学特性，并具有纳米材料的基本效应，在生物医学、光学器件制造、DNA分析检测等方面展现出极大的应用潜力，受到了化学、生命科学、环境科学等相关领域广泛关注。DNA是遗传的物质基础，生物体的遗传信息是由DNA转录给RNA并翻译成蛋白质，蛋白质执行多种生物功能，因此，DNA分析测定一直是分子生物学领域研究的热门课题。

共振瑞利散射(Resonance Rayleigh Scattering,RRS)技术起始于二十世纪九十年代初期，是一种新的分析技术。Pasternack等人首次利用共振瑞利散射技术研究了卟啉类的化合物在核酸分子上J型堆积，此研究结果表明该方法可以应用于研究生物大分子的识别、组装、超分子排列等方面，从此开启了共振光散射技术在多种领域应用的大门。利用共振光散射法定量分析物质的含量，具有操作简便、分析速度快、灵敏度高及选择性好等特点，目前有关CdSe/CdS量子点与核酸的共振光散射分析未见报道，因此，采用共振光散射技术来测定核酸等生物大分子是非常方便的技术手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种CdSe/CdS量子点共振光散射法测定DNA含量的方法，该方法利用DNA对CdSe/CdS量子点的共振光散射效应，能够快速、灵敏地对DNA含量进行测定。

为此，本发明的提供了如下技术方案：

一种CdSe/CdS量子点共振光散射法测定DNA含量的方法，包括以下步骤：

(1)取CdSe/CdS量子点配制成1.5×10^-3mol/L的溶液，4℃保存备用；

(2)以脱氧核糖核酸样品配制成低浓度至高浓度的标准溶液若干份，记录标准溶液中DNA的浓度，4℃保存备用；

(3)将pH＝8.0，浓度为0.05mol/L的PBS缓冲液，1mL 5×10^-5mol/L CdSe/CdS量子点溶液分别与0.2～1mL不同浓度的标准溶液混合，配制成3mL体系，摇匀并放置8～12min，作为供试液；

(4)另取1.0mLCdSe/CdS量子点溶液与2.0mL PBS缓冲液混匀后，摇匀并放置与供试液相同时间，作为空白液；

(5)25℃的条件下，用荧光分光光度计(Δλ＝0)，设置激发波长为260nm，发射波长为505nm，激发狭缝宽度及发射狭缝宽度分别为5nm和10nm处，扫描范围为250～800nm条件下各供试液的荧光光谱，记录共振瑞利散射光谱图的变化，在最大共振瑞利散射峰处分别测量CdSe/CdS的I₀和CdSe/CdS-DNA的I_RRS，并且计算得到ΔI_RRS＝I₀-I_RRS；其中I₀为未加DNA前的荧光强度，I_RRS为加入DNA后的荧光强度；

(6)以DNA浓度为横坐标，DNA荧光强度ΔI_RRS为纵坐标绘制标准工作曲线；