[发明专利]一种槲皮素纳米颗粒的制备方法及其在制备抗乳腺癌药物上的应用

说明书

本发明公开了一种水溶性槲皮素纳米颗粒的制备方法及其在制备抗乳腺癌药物中的应用。这种纳米颗粒通过单步纳米沉淀法进行制备，是一种加载有槲皮素的PLGA/TPGS纳米颗粒，槲皮素与PLGA/TPGS之间是通过非共价作用结合的，这种纳米制剂具有水溶性好，载药量高，均匀和稳定的特征。另外，在乳腺癌的应用中具有良好的效果，这种纳米制剂比天然槲皮素更有效（大于十倍），通过这种纳米包裹大大提高了槲皮素对乳腺癌的药效，解决了单独的槲皮素在药物应用中水溶性差，容易被氧化而使体内功效丧失，并且所使用的剂量在生理学上是过高的等缺点，这将为治疗乳腺癌的药物开发提供新思路，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及槲皮素，特别是涉及一种水溶性的槲皮素纳米颗粒的制备及其在制备抗乳腺癌上药物中的应用。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。近年来，其发病率呈现出显着的上升趋势。根据相关基因表达谱，乳腺癌可分为三种主要亚型。三阴性乳腺癌定义为乳腺癌细胞中缺乏三种受体，即雌激素受体，孕激素受体和人表皮生长因子受体，三阴性乳腺癌约占所有乳腺癌的15～20％。不幸的是，三阴性乳腺癌具有高度异质性和极端攻击性，使其治疗成为一项艰巨的任务，导致死亡率高于其他两种类型。包括化疗，放射和手术切除等常规治疗，仅适用于早期和晚期三阴性乳腺癌肿瘤，因为尚未发现有效的三阴性乳腺癌分子靶标，甚至目前的标准化疗方案通常受到短期反应和耐药性的限制。由于新抗癌药物的发现是一个耗时且昂贵的过程，目前的研究不仅集中于抑制潜在的靶标，而且通过设计新的药物递送系统来增强现有药物的抗癌潜力。

尿激酶型纤溶酶原激活物（尿激酶）是一种细胞外丝氨酸蛋白水解酶，血浆中的生理浓度约为2 ng / mL，半衰期为3～5分钟。尿激酶参与许多生理和病理过程，如伤口愈合，纤维蛋白降解，受精过程，炎症细胞迁移，血管外血肿消散，肿瘤细胞侵袭和转移。目前，尿激酶被作为乳腺癌的生物标志物之一，尿激酶激活细胞周围的纤溶酶原，降解肿瘤细胞的细胞外基质和基底膜，促进肿瘤细胞的侵袭和转移。并且，研究还表明，抑制尿激酶与其受体尿激酶受体之间的相互作用可以抑制肿瘤的侵袭和转移，这可能是抗癌药物开发的有效靶点。因此，尿激酶抑制剂的研究很好对癌症临床预后和抗癌转移的意义。

根据先前的研究，黄酮类和丝氨酸蛋白酶之间存在广泛的相互作用。其中，槲皮素与尿激酶结合，对尿激酶具有一定抑制作用（IC₅₀ =7 μM）。槲皮素，也称为五羟黄酮（图1），是植物中衍生的类黄酮，存在于水果，蔬菜和谷物等植物中。黄酮类化合物具有广泛的生物活性，自古以来就被用于许多疾病和保健中作为中草药。然而，黄酮类化合物缺乏治疗特定疾病的特异性，单独使用黄酮类化合物的抗肿瘤作用通常是远非令人满意。因此，需要深入研究它们的结构和功能。在我们以前的工作中，我们已经测定了槲皮素与尿激酶结合的复合物晶体结构，并初步了解了槲皮素对水解酶抑制的分子机制。我们发现槲皮素以与传统尿激酶抑制剂（例如苯胍）不同的结合方式与尿激酶相互作用。槲皮素的主要药效基团是儿茶酚基团，其与尿激酶底物识别袋中的189位的天冬氨酸相互作用。然而，为了进一步阐明槲皮素对乳腺癌细胞的抗侵袭和迁移作用，且槲皮素还存在一些问题需要解决，例如水溶性差，氧化敏感性导致功效丧失，所用剂量在生理上无法获得等。因为PLGA具有生物降解性、持续释放功效以及包封生物活性分子的长期稳定性，PLGA与大多数其他类型的递送系统相比显示出更加有利的性能。TPGS是另一种众所周知的生物相容性和两亲性聚合物，广泛用于纳米粒子表面涂层中以改善包封效率。因此，在本研究中，我们将槲皮素包裹在PLGA/ TPGS纳米颗粒（Qu-NPs）中，以获得具有高载药量的均匀且稳定的纳米颗粒。结果表明，槲皮素纳米粒大大提高了槲皮素对三阴性乳腺癌细胞增殖，迁移和侵袭的抑制作用。本研究将为三阴性乳腺癌治疗的药物开发提供新思路，并且提供了一种药效增强的槲皮素纳米粒的制备方法。

发明内容

槲皮素能够以微摩尔效力抑制乳腺癌生物标志物之一的尿激酶型纤溶酶原激活物（尿激酶），尿激酶受体尿激酶但是单独的槲皮素药效不强，专一性不高，而且还存在水溶性差，容易被氧化而使体内功效丧失，并且所使用的剂量在生理学上是过高的等缺点。