[发明专利]提高特异性的检测犬副流感的反应液、引物对、探针及试剂盒

权利要求书

1.用于犬副流感病毒检测的提高特异性的犬副流感病毒检测试剂盒，其特征在于，试剂盒采用的检测方法为反转录聚合酶链式扩增方法，其反应液包括反转录酶、脱氧核糖核苷三磷酸、脱氧核核酸聚合酶、引物、镁离子成分、recA蛋白、三磷酸腺苷以及经过修饰的特异性引物和荧光探针。

2.一种提高权利要求1所述的试剂盒特异性的方法，其特征在于，反应液中的recA蛋白限制反转录反应中的错配。

3.根据权利要求2所述的提高试剂盒特异性的方法，其特征在于，recA蛋白含量范围为0.001%~0.1%。

4.根据权利要求2所述的提高试剂盒特异性的方法，其特征在于，recA蛋白活性所需的能量由ATP分解提供。

5.根据权利要求4所述的提高试剂盒特异性的方法，其特征在于，ATP含量范围为10ng/L~1000ng/L。

6.根据权利要求5所述的提高试剂盒特异性的方法，其特征在于，ATP含量浓度为100ng/L。

7.根据权利要求2所述的提高试剂盒特异性的方法，其特征在于，反转录RNA模板与引物碱基序列100%相同，才能进行反转录反应。

8.根据权利要求2所述的提高试剂盒特异性的方法，其特征在于，反转录反应产物cDNA序列与模板100%相同，最终确保RT-PCR反应的特异性。

9.用于检测犬副流感病毒基因的引物对，其特征在于，包括有：碱基序列如SEQ ID No:1、SEQ ID No:2所示的特异性引物；其中，所述碱基序列的5’端碱基具有氨基修饰基团。

10.用于检测犬副流感病毒基因的探针，其特征在于，探针进行修饰，包括有：碱基序列如SEQ ID No:3所示的荧光探针；其中，所述碱基序列中的一个碱基具有氨基修饰基团。

11.根据权利要求10所述的用于检测犬副流感病毒基因的探针，其特征在于，所述碱基序列如SEQ ID No:3的荧光探针，其5’端开始第三个碱基具有氨基修饰基团。

12.用于检测犬副流感病毒基因的犬副流感病毒检测试剂盒，其特征在于，包括引物对、荧光探针选择、配制RT-PCR反应体系、设置反应条件的步骤，所述引物对采用权利要求8所述的引物对，所述荧光探针采用权利要求9所述的荧光探针。

13.根据权利要求12所述的检测犬副流感病毒基因的犬副流感病毒检测试剂盒，其特征在于，所述设置反应条件的步骤中，反转录反应温度为42~50℃，PCR反应温度设为60~63.2℃。