[发明专利]检测猕猴血浆中中期因子反义寡核苷酸含量的方法

权利要求书

1.一种检测猕猴血浆中中期因子反义寡核苷酸含量的方法，其特征在于，包括：

(1)取含有中期因子反义寡核苷酸的待测猕猴血浆，向所述猕猴血浆中加入流感泰德作为内标液，再加入适量氨水溶液、苯酚/二氯甲烷混合液，然后依次进行涡流后离心，以便得到处理后血样；

(2)取所述血样的上清液并进行LC/MS/MS分析；

其中，所述LC/MS/MS分析采用的色谱条件如下：

色谱柱：WatersMS C18色谱柱，2.1mm×50mm；

流动相A：六氟异丙醇HFIP和三乙胺TEA的混合水溶液；

流动相B：六氟异丙醇HFIP与三乙胺TEA的混合甲醇水溶液；

流速：200μL/min；

洗脱程序：

0min 5％B相，3min 100％B相，7min 100％B相，7.5min 5％B相，12min 5％B相；

所述LC/MS/MS分析采用的质谱条件如下：

以高纯氮气作为碰撞气、气帘气、ESI源负离子扫描，MRM扫描方式；

质谱条件为：碰撞气：12；气帘气：10；离子源1：40；离子源2：70；离子电离电压：-4500；温度：200；

检测物参数

中期反义因子MRM：695.8→304.2,内标MRM：675.8→319.0，两者DP：-85；EP：-11；CE：-45；CXP：-18；

(3)绘制标准曲线，并根据标准曲线法对所述待测猕猴血浆中所述中期因子反义寡核苷酸的含量进行定量分析；

所述流动相A为200mM HFIP和2.85mM TEA的混合水溶液；

所述流动相B为200mM HFIP和2.85mM TEA的甲醇水溶液，所述甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为60∶40。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流感泰德的浓度为100μg/mL，所述流感泰德的加入量为所述待测猕猴血浆的25体积％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氨水的浓度为5％，所述氨水的加入量为所述待测猕猴血浆的2.5体积。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述苯酚/二氯甲烷混合液中苯酚与二氯甲烷的体积比为1∶1，所述苯酚/二氯甲烷混合液的加入量与所述待测猕猴血浆体积比为1∶1。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述涡流时间为10min；所述离心是在15000rpm/min的条件下进行5min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准曲线的线性范围为0.18-200μg/mL。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的最低检测限为0.18μg/mL。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所述待测猕猴血浆中的所述中期因子反义寡核苷酸是通过对猕猴注射中期因子反义寡核苷酸纳米制剂获得的。