[发明专利]与西瓜短蔓基因Cldw1共分离的分子标记

权利要求书

1.一种用于检测西瓜茎蔓长度性状的引物对，其特征在于，该引物对具体为：

dCAPS3-F: 5’-TATGCTTATACTCTCACTGGAATT-3’，

dCAPS3-R: 5’-TTAACATTGCAGCCAAAAATAG-3’；

利用该引物对进行PCR扩增时：

当PCR扩增产物仅有一条如SEQ ID NO .1所示的长度为120 bp的特征条带时，待测西瓜为短蔓性状品种；

当PCR扩增产物仅有一条如SEQ ID NO.2所示的长度为121 bp的特征条带时，待测西瓜为纯合长蔓性状品种；

当PCR扩增产物既有一条如SEQ ID NO.2所示的长度为121 bp的特征条带，又有一条如SEQ ID NO .1所示的长度为120 bp的特征条带时，待测西瓜为杂合长蔓性状品种。

2.权利要求1所述检测西瓜茎蔓长度性状的引物对在西瓜茎蔓长度性状判定中的应用，其特征在于，利用该引物对的PCR扩增产物来检测判定西瓜茎蔓长度性状；具体判定时：

当PCR扩增产物仅有一条如SEQ ID NO .1所示的长度为120 bp的特征条带时，待测西瓜为短蔓性状品种；同时，该PCR扩增产物被EcoR1酶切后，酶切产物中包含一个100bp长度片段；

当PCR扩增产物仅有一条如SEQ ID NO.2所示的长度为121 bp的特征条带时，待测西瓜为纯合长蔓性状品种；同时，该PCR扩增产物不能被EcoR1酶切；

当PCR扩增产物既有一条如SEQ ID NO.2所示的长度为121 bp的特征条带，又有一条如SEQ ID NO .1所示的长度为120 bp的特征条带时，待测西瓜为杂合长蔓性状品种；同时，如SEQ ID NO .1所示的长度为120 bp的特征条带被EcoR1酶切后，酶切产物中包含一个100bp长度片段。

3.利用权利要求1所述检测西瓜茎蔓长度性状的引物对的西瓜茎蔓长度性状的检测判定方法，其特征在于，采用PCR扩增方法检测判定，具体包括如下步骤：

（1）提取待测西瓜品种基因组DNA；

（2）以步骤（1）中所提取基因组DNA为模板，利用权利要求1所述引物对进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行电泳检测和测序、以及进行EcoR1酶切并对酶切产物进行电泳；

（3）依据步骤（2）的电泳条带和测序、及酶切结果进行判定，具体判定标准为：

当待测西瓜品种为短蔓性状品种，PCR扩增产物仅有一条长度为120 bp的特征条带，该120bp的特征条带的具体碱基序列如SEQ ID NO.1所示；PCR扩增产物被EcoR1酶切后，酶切产物中包含一个100bp长度片段；

当待测西瓜品种为长蔓性状品种，则有两种情况：

当PCR扩增产物中仅有一条长度为121 bp的特征条带时，该品种为纯合长蔓性状品种，该121bp的特征条带的具体碱基序列如SEQ ID NO.2所示；该PCR产物不能被EcoR1酶切；

当PCR扩增产物中既有一条长度为121 bp的特征条带，又有一条长度为120 bp的特征条带时，表明该长蔓性状品种为杂合长蔓性状品种。

4.如权利要求3所述的西瓜茎蔓长度性状的检测判定方法，其特征在于，步骤（1）中，采用CTAB法提取其基因组DNA。

5.如权利要求3所述的西瓜茎蔓长度性状的检测判定方法，其特征在于，步骤（2）中，PCR扩展时，PCR扩增时，10μL扩增体系设计如下：

基因组DNA，1μL；

dCAPS3-F，0.5μL；

dCAPS3-R，0.5μL；

PCR MagicMix，5.0μL；

ddH₂O ，3.0μL；

PCR扩增程序为：94℃、5min；94℃、30s，55℃、30s，72℃、30s，35个循环；72℃、5min。

6.如权利要求3所述的西瓜茎蔓长度性状的检测判定方法，其特征在于，步骤（2）中，EcoR1酶切时， 10μL酶切体系设计如下：

PCR产物，2μL；

10×Buffer EcoR1，1μL；

EcoR1，1μL；

ddH₂O，6μL；

37℃酶切10h。