[发明专利]一种快速定量检测靶标DNA的方法

权利要求书

1.一种非疾病诊断目的的快速定量检测靶标DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，变性：将待检测样本的细胞破碎，使蛋白质变性、RNA降解，且使DNA变性分解为单链DNA，获得变性后的样本；

步骤二，杂交：将步骤一中获得的变性后的样本与保存在pH值为3.5-4.0的核酸保存液中的特异性的单链RNA探针混合，在pH值为7.0-7.4的范围内、温度为65℃的条件下杂交45min，使特异性的单链RNA探针与变性后样本中的单链DNA进行杂交，形成DNA-RNA杂合体溶液；

步骤三，捕获：将第一抗体固定在载体上，再加入步骤二中获得的DNA-RNA杂合体溶液，在温度为42℃的条件下，用第一抗体对DNA-RNA杂合体溶液中的杂合体捕获60min，将液体移除；

步骤四，检测：将步骤三中获得的用第一抗体捕获的DNA-RNA杂合体与保存于蛋白保存液中的第二抗体在42℃进行反应30min后，洗涤，在室温避光条件下静置10min，进行检测；

所述步骤二中，所述变性后的样本中的单链DNA与单链RNA探针形成DNA-RNA杂合体；

所述步骤三中，第一抗体为特异性识别杂合体的物质，所述特异性识别杂合体的物质为DNA-RNA杂合体结构特异性抗体、多克隆抗体或单克隆抗体或其片段、蛋白质、催化失活的核糖核酸酶H、核酸、核酸适配体或与DNA-RNA杂合体特异性结合形成三链体结构的寡核苷酸中的一种；

所述第二抗体上携带有标记物，所述标记物在出现受激发光激发反应而发射荧光，或金颗粒聚集而显色，或酶催化反应而发光或显色；

所述步骤二中，所述特异性的单链RNA探针可以为针对靶标DNA的全长单链RNA探针或者针对部分靶标DNA的片段单链RNA探针；当特异性的单链RNA探针为针对靶标DNA的全长单链RNA探针时，针对靶标DNA的全长单链RNA探针为连续的针对靶标DNA的全长单链RNA探针或者分段的针对靶标DNA的全长单链RNA探针；

所述分段的针对靶标DNA的全长单链RNA探针的长度大于100bp。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤四中，所述第二抗体为DNA-RNA杂合体结构特异性抗体，多克隆抗体或单克隆抗体或其片段，蛋白质，催化失活的核糖核酸酶H、核酸、核酸适配体或与DNA-RNA杂合体特异性结合形成三链体结构的寡核苷酸中的一种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤二中，特异性的单链RNA探针携带修饰物；所述步骤四中，采用能与修饰物结合并且出现特异性显色的物质代替第二抗体。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述修饰物为生物素；所述能与修饰物结合并且出现特异性显色的物质为亲和素。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤二中，特异性的单链RNA探针与变性后的样本的体积比为1:3。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤三中的载体为固相载体或是非固相载体。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述固相载体为平板、微孔板、载玻片、皿、磁珠、微球、芯片、膜、微阵列、试管、硅、玻璃、陶瓷、金属或者塑料中的至少一种；所述非固相载体为在其他抗体上标记荧光共振能量转移探针。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤四中，标记物为荧光标记物、金标记物、酶标记物中的一种。