[发明专利]一种载体组合及其应用有效
| 申请号： | 201910441545.9 | 申请日： | 2019-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN110129366B | 公开（公告）日： | 2020-09-01 |
| 发明（设计）人： | 赵金山;张宁;李和刚;秦怀远;辛京京 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 薛红凡 |
| 地址： | 266000 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 载体 组合 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种载体组合，其特征在于，所述载体组合包括pCpf1-sgRNA和pY010-RR；
所述pCpf1-sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；
所述pY010-RR的构建方法包括：将CPF4077基因片段插入到pY010载体中，得到pY010-RR；
所述CPF4077基因片段的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；
所述CPF4077基因片段取代pY010载体中原有的Cpf1编码序列。
2.权利要求1所述的载体组合在哺乳动物的基因编辑中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
1）根据哺乳动物的基因组上的基因设计两对单链DNA寡核苷酸，将所述两对单链DNA寡核苷酸分别退火，得到两个双链DNA片段；
2）将所述步骤1）得到的两个双链DNA片段分别插入到权利要求1所述的pCpf1-sgRNA的sgRNA表达框中，得到两个载体；
3）将所述步骤2）得到的两个载体与权利要求1所述的pY010-RR共转染到哺乳动物细胞中，实现对哺乳动物的基因编辑。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤3）两个载体与pY010-RR的质量比为(1~5):(1~5):(1~5)。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤1）单链DNA寡核苷酸的长度为20~30nt。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于青岛农业大学，未经青岛农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910441545.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
