[发明专利]中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法及定量分析方法

权利要求书

1.中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤：

获取神经示踪剂标记追踪后得到的脑组织正切面脑片；

应用数字化的显微系统和分析系统量化标记神经示踪剂阳性位点，神经示踪剂阳性位点是相对于神经示踪剂注射中心的x, y 二维坐标点；

创建轴突连接图谱，具体包括以下一个或多个图谱：

（3-1）复合轴突投射图谱，以注射中心，功能相关的解剖区的BDA阳性轴突位点x, y二维坐标将分别记录下来，经由细胞色素氧化酶染色，以及对脊髓皮质神经元逆行追踪标记产生的小鼠躯体感觉胞体图谱即是复合性轴突投射图谱；

（3-2）轴突极性分布图谱，将相对于神经示踪剂注射中心原点的神经示踪剂阳性轴突位点x, y坐标位置标记到一个图谱上，得到轴突极性分布图谱；

（3-3）脑卒中后轴突线性关系图谱，计算从神经示踪剂注射中心到同侧半球的轴突数量，并进行统计，得到脑卒中后轴突线性关系图谱。

2.根据权利要求1所述的中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法，其特征在于：所述神经示踪剂为BDA。

3.根据权利要求2所述的中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法，其特征在于：脑组织正切面脑片为小鼠的脑组织正切面脑片，小鼠的脑组织正切面脑片具体获得过程如下：小鼠注射神经示踪剂后第7天，常规麻醉小鼠，将其固定，用剪刀剪开胸部皮肤，暴露出皮下组织，然后用镊子提起剑突，用剪刀剪开胸腔，剪断两侧肋骨，暴露整个胸腔。

4.用镊子撕开心包膜，暴露心脏，用眼科剪剪开右心耳，然后提起心尖将准备好的生理盐水注射器插入左心室，注射，30ml生理盐水灌流5分钟至肺和肝的颜色到灰白色，然后用20ml多聚甲醛灌流3分钟，取下小鼠，用剪刀在颈部离断头颅，用剪刀在小鼠头颅中间皮肤剪一刀，将两边皮肤向下翻用手捏住，暴露整个颅骨，用眼科剪从脊髓端插入椎孔，沿着颅正中线剪开颅骨，注意剪刀向上翘一些，以免误伤脑组织，剪开后用弯眼科镊分离颅骨，小心分离，直至暴露整个大脑，然后用弯镊伸入颅底离断颅底神经，取出整个脑子，分开左右半球，用小铲去除脑干和海马，压扁全脑皮质至2mm，放多聚里后固定24h，30%蔗糖缓冲液48h，OCT包埋，正切面 40µm切片。

5. 权利要求1-3任一项所述的中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法所建立的图谱定量分析方法，其特征在于：所建立的图谱为图谱复合轴突投射图谱，该图谱通过Hotelling’s T²进行分析，组内比较采用配对双尾t检验。

6. 权利要求1-3任一项所述的中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法所建立的图谱定量分析方法，其特征在于：所建立的图谱为轴突极性分布图谱，该图谱采用Watson’s非参数双标本 U² 检验分析，组内比较采用配对双尾t检验。

7.权利要求1-3任一项所述的中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法所建立的图谱定量分析方法，其特征在于：所建立的图谱为脑卒中后轴突线性关系图谱，该图谱采用单因素方差分析结合Tukey-Kramer检验分析，组内比较采用配对双尾t检验。

8.权利要求1-3任一项所述的中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法所建立的图谱定量分析方法，其特征在于：所建立的图谱为复合轴突投射图谱、轴突极性分布图谱、脑卒中后轴突线性关系图谱中的两者，采用两独立样本的双尾t检验分析。

9.权利要求1-3任一项所述的中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法所建立的图谱定量分析方法，其特征在于：所建立的图谱为复合轴突投射图谱、轴突极性分布图谱、脑卒中后轴突线性关系图谱，采用多因素的方差分析，结合Tukey-Kramer检验分析。