[发明专利]中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法及定量分析方法

说明书

本发明涉及中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法及定量分析方法，包括以下步骤：（1）获取神经示踪剂标记追踪后得到的脑组织正切面脑片；（2）应用数字化的显微系统和分析系统量化标记神经示踪剂阳性位点，神经示踪剂阳性位点是相对于神经示踪剂注射中心的x,y二维坐标点；（3）通过细胞色素氧化酶染色，以及对脊髓皮质神经元逆行追踪标记，得到躯体感觉胞体图谱；（4）创建轴突连接图谱，为复合轴突投射图谱、轴突极性分布图谱、脑卒中后轴突线性关系图谱中的一种或多种，为鉴定脑中风治疗效果，分析脑中风行为功能具有重要的科学和临床意义，可以用于脑中风新药研发过程临床前研究阶段进行动物实验的治疗效果验证，加速该阶段的研发进程。

技术领域

本发明涉及中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法及定量分析方法。

背景技术

脑中风是人类重要的公共卫生问题，具有高致残率和高致死率的特点, 在我国已占据死亡的病因第一位。缺血性脑中风占所有脑卒中的大约85%。目前已经发现脑中风病人存在自发性但有限修复过程，这个过程与中风周区皮质神经细胞的轴突出芽密切相关。

脑卒中产生轴突出芽的神经元胞体主要来自二个部位：中风区临近皮质的神经细胞以及卒中区对侧半球皮质的神经细胞。由此，中风同侧以及对侧的皮质由于神经细胞轴突出芽，都建立了新型的链接模式。然而，无论是在脑卒中病人或是模型动物，卒中周围皮质区/中风周区的神经元出芽和神经可塑性，即同侧皮质的感觉区、运动区和语言功能区的可塑性与卒中行为改善和功能恢复最为密切。促进这些区域的轴突出芽可以改善卒中行为功能；反之，限制中风周区的轴突新的连接，则阻碍卒中功能的恢复，显示这些新近形成轴突连接的特殊分区，与脑卒中神经行为功能的恢复形成因果关系。

脑中风治疗药物的相关研发以及脑中风行为功能的研究均为重要的研究方向。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法及定量分析方法。

本发明所采取的技术方案如下：中风周区皮质的轴突连接图谱的建立方法，包括以下步骤：

（1）获取神经示踪剂标记追踪后得到的脑组织正切面脑片；

（2）应用数字化的显微系统和分析系统量化标记神经示踪剂阳性位点，神经示踪剂阳性位点是相对于神经示踪剂注射中心的x, y 二维坐标点；

（3）创建轴突连接图谱，具体包括以下一个或多个图谱：

（3-1）复合轴突投射图谱，以注射中心，功能相关的解剖区的BDA阳性轴突位点x, y二维坐标将分别记录下来，经由细胞色素氧化酶染色，以及对脊髓皮质神经元逆行追踪标记产生的小鼠躯体感觉胞体图谱即是复合性轴突投射图谱；

（3-2）轴突极性分布图谱，将相对于神经示踪剂注射中心原点的神经示踪剂阳性轴突位点x, y坐标位置标记到一个图谱上，得到轴突极性分布图谱；

（3-3）脑卒中后轴突线性关系图谱，计算从神经示踪剂注射中心到同侧半球的轴突数量，并进行统计，得到脑卒中后轴突线性关系图谱。

所述神经示踪剂为BDA（生物素葡聚糖胺）。