[发明专利]一种基于RPA快速检测南方水稻黑条矮缩病毒的方法

权利要求书

1.引物对，由引物SRBSDV-F和引物SRBSDV-R组成；

所述引物SRBSDV-F为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物SRBSDV-R为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子。

2.权利要求1所述的引物对的应用，为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4):

(b1)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为南方水稻黑条矮缩病毒；

(b2)制备用于鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为南方水稻黑条矮缩病毒的试剂盒；

(b3)检测待测生物样本中是否含有南方水稻黑条矮缩病毒；

(b4)制备用于检测待测生物样本中是否含有南方水稻黑条矮缩病毒的试剂盒。

3.含有权利要求1所述引物对的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下(c1)或(c2)：

(c1)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为南方水稻黑条矮缩病毒；

(c2)检测待测生物样本中是否含有南方水稻黑条矮缩病毒。

4.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。

5.一种鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为南方水稻黑条矮缩病毒的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测病毒的总RNA，并反转录为cDNA；

(2)以步骤(1)提取的cDNA为模板，采用权利要求1所述的引物对进行重组酶聚合酶扩增，如果PCR扩增产物中含有152bp±5bp的DNA片段、待测病毒为或候选为南方水稻黑条矮缩病毒，如果PCR扩增产物中不含有152bp±5bp的DNA片段、待测病毒为或候选为非南方水稻黑条矮缩病毒。

6.一种鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为南方水稻黑条矮缩病毒的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测病毒的总RNA，并反转录为cDNA；

(2)检测步骤(1)得到的cDNA中是否含有特异DNA片段，如果含有特异DNA片段、待测病毒为或候选为南方水稻黑条矮缩病毒，如果不含有特异DNA片段、待测病毒为或候选为非南方水稻黑条矮缩病毒；

所述特异DNA片段为南方水稻黑条矮缩病毒的cDNA中权利要求1所述的引物对的靶序列。

7.一种检测待测生物样本中是否含有南方水稻黑条矮缩病毒的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测生物样本的总RNA，并反转录为cDNA；

(2)以步骤(1)提取的cDNA为模板，采用权利要求1所述的引物对进行重组酶聚合酶扩增，如果PCR扩增产物中含有152bp±5bp的DNA片段、待测生物样本中含有或疑似含有南方水稻黑条矮缩病毒，如果PCR扩增产物中不含有152bp±5bp的DNA片段、待测生物样本中不含有或疑似不含有南方水稻黑条矮缩病毒。

8.一种检测待测生物样本中是否含有南方水稻黑条矮缩病毒的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测生物样本的总RNA，并反转录为cDNA；

(2)检测步骤(1)得到的cDNA中是否含有特异DNA片段，如果含有特异DNA片段、待测生物样本中含有或疑似含有南方水稻黑条矮缩病毒，如果不含有特异DNA片段、待测生物样本中不含有或疑似不含有南方水稻黑条矮缩病毒；

所述特异DNA片段为南方水稻黑条矮缩病毒的cDNA中权利要求1所述的引物对的靶序列。