[发明专利]制备AMH抗体的质粒、抗体、其制备方法及筛选方法，试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于制备AMH单克隆抗体的质粒，其特征在于，包括：

质粒载体；

AMH基因，所述AMH基因用于编码AMH；以及

促抗体形成基因，所述促抗体形成基因的表达产物能够促进AMH免疫形成AMH单克隆抗体，所述促抗体形成基因包括β2-微球蛋白基因和细胞因子基因中的一种或多种；

所述AMH基因、所述β2-微球蛋白基因和所述细胞因子基因插入到同一个或不同的所述质粒载体中。

2.根据权利要求1所述的用于制备AMH单克隆抗体的质粒，其特征在于，所述细胞因子选自Flt3L、GM-CSF和CCL20中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的用于制备AMH单克隆抗体的质粒，其特征在于，所述AMH基因和所述β2-微球蛋白基因插入到同一个所述质粒载体中。

4.根据权利要求1所述的用于制备AMH单克隆抗体的质粒，其特征在于，所述促抗体形成基因包括所述β2-微球蛋白基因和所述细胞因子基因，所述细胞因子基因包括Flt3L基因、GM-CSF基因和CCL20基因，所述AMH基因和所述β2-微球蛋白基因插入到第一所述质粒载体中，所述AMH基因单独插入到第二所述质粒载体中，所述Flt3L基因插入到第三所述质粒载体中，所述GM-CSF基因插入到第四所述质粒载体中，所述CCL20基因插入到第五所述质粒载体中。

5.一种AMH单克隆抗体，其特征在于，所述AMH单克隆抗体采用如权利要求1-4任一项所述的用于制备AMH单克隆抗体的质粒经动物免疫形成。

6.一种根据权利要求5所述的AMH单克隆抗体的制备方法，包括：

将所述用于制备AMH单克隆抗体的质粒注射入小鼠尾静脉得到免疫小鼠；

将骨髓瘤细胞与所述免疫小鼠的脾脏细胞进行融合得到杂交瘤细胞；

筛选能够产生AMH单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞；

将所述阳性杂交瘤细胞注射入其它小鼠腹腔进行培养，在所述培养后的小鼠的腹水中得到所述AMH单克隆抗体。

7.一种根据权利要求5所述的AMH单克隆抗体的配对组合的筛选方法，包括：

提供分子互作检测装置，所述分子互作检测装置包括生物传感器，所述生物传感器包括生物膜层，所述AMH单克隆抗体能够固定在所述生物膜层上，当所述生物膜层上结合分子时所述生物膜层的光学厚度增大，所述生物膜层的光学厚度变化能够通过所述生物传感器以信号输出；

将第一AMH单克隆抗体固定在所述生物膜层上；

将AMH负载在所述固定有所述第一AMH单克隆抗体的生物膜层上，形成抗体-抗原结合生物膜层；

将第二AMH单克隆抗体负载在所述抗体-抗原结合生物膜层上；以及

通过检测所述生物膜层的光学厚度变化筛选与所述AMH形成三明治夹心结构的所述第一AMH单克隆抗体和所述第二AMH单克隆抗体的组合，所述光学厚度变化越大，所述第一AMH单克隆抗体和所述第二AMH单克隆抗体的组合与AMH越容易形成所述三明治夹心结构，所述变化越小，所述第一AMH单克隆抗体和所述第二AMH单克隆抗体的组合与AMH越不容易形成所述三明治夹心结构。

8.一种AMH检测试剂盒，其特征在于，包括：

第一抗体；

第二抗体；

所述第一抗体和所述第二抗体选自权利要求5所述的AMH单克隆抗体，且所述第一抗体和AMH的结合位点与所述第二抗体和AMH的结合位点不同；

还包括：固相载体和化学检测分子，所述第一抗体能够包被在所述固相载体上，所述化学检测分子能够标记在所述第二抗体上，所述化学检测分子能够催化底物发光。

9.根据权利要求8所述的AMH检测试剂盒，其特征在于，所述第一抗体和所述第二抗体的组合通过权利要求7所述的AMH单克隆抗体的配对组合的筛选方法筛选获得。

10.一种AMH的检测方法，采用如权利要求8-9任一项所述的AMH检测试剂盒，并包括以下步骤：

将检测样品、所述第一抗体包被的固相载体和所述化学检测分子标记的第二抗体混合得到混合物；

从所述混合物中分离所述固相载体；

检测所述分离得到的所述固相载体催化底物的发光信号强度；以及

将所述发光信号带入到AMH浓度与发光信号关系的标准曲线中，得到所述检测样品中的AMH浓度。