[发明专利]制备AMH抗体的质粒、抗体、其制备方法及筛选方法，试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种用于制备AMH单克隆抗体的质粒，包括：质粒载体；AMH基因，所述AMH基因用于编码AMH；以及促抗体形成基因，所述促抗体形成基因的表达产物能够促进AMH免疫形成AMH单克隆抗体，所述促抗体形成基因包括β2‑微球蛋白基因和细胞因子基因中的一种或多种；所述AMH基因、所述β2‑微球蛋白基因和所述细胞因子基因插入到同一个或不同的所述质粒载体中。本发明还公开了一种AMH单克隆抗体制备方法。本发明还公开了一种AMH单克隆抗体的配对组合的筛选方法。本发明还公开了一种AMH检测试剂盒。本发明还公开了一种AMH的检测方法。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及制备AMH抗体的质粒、抗体、其制备方法及筛选方法，试剂盒及检测方法。

背景技术

抗缪勒氏管激素(AMH)是一种140kDa的二聚体糖蛋白，通常用作评估卵巢储备和女性生育能力的生化标记物。即使使用激素避孕药或处于自发性月经周期，血清和血浆AMH水平也相对稳定。

AMH检测方法从最早的免疫细胞化学分析(ICA)和放射免疫分析(RIA)到目前的酶联免疫吸附试验(ELISA)。ICA和RIA专注于AMH在动物组织中的定位和功能研究，并未达到临床诊断所需的标准。尽管ELISA可用于AMH的临床分析，但由于样品储存时间和反复冻融等因素，结果不稳定，并且在大多数情况下，样品线性稀释后获得的实验结果较差。在免疫测定中，AMH抗体是AMH检测的关键试剂。全长AMH分子的结构复杂，由于半胱氨酸内二硫化物的存在，成熟区域不处于暴露状态。因此，针对具有复杂结构的AMH蛋白的高质量单克隆抗体的开发在技术上仍具有挑战性，从而影响AMH的检测。

发明内容

基于此，有必要针对现有AMH单克隆抗体的制备质量不高的问题，提供一种制备AMH抗体的质粒、抗体、其制备方法及筛选方法，试剂盒及检测方法。

一种用于制备AMH单克隆抗体的质粒，包括：

质粒载体；

AMH基因，所述AMH基因用于编码AMH；以及

促抗体形成基因，所述促抗体形成基因的表达产物能够促进AMH免疫形成AMH单克隆抗体，所述促抗体形成基因包括β2-微球蛋白基因和细胞因子基因中的一种或多种；

所述AMH基因、所述β2-微球蛋白基因和所述细胞因子基因插入到同一个或不同的所述质粒载体中。

在其中一个实施例中，所述细胞因子选自Flt3L、GM-CSF和CCL20中的一种或多种。

在其中一个实施例中，所述AMH基因和所述β2-微球蛋白基因插入到同一个所述质粒载体中。

在其中一个实施例中，所述促抗体形成基因包括所述β2-微球蛋白基因和所述细胞因子基因，所述细胞因子基因包括Flt3L基因、GM-CSF基因和CCL20基因，所述AMH基因和所述β2-微球蛋白基因插入到第一所述质粒载体中，所述AMH基因单独插入到第二所述质粒载体中，所述Flt3L基因插入到第三所述质粒载体中，所述GM-CSF基因插入到第四所述质粒载体中，所述CCL20基因插入到第五所述质粒载体中。

一种AMH单克隆抗体，所述AMH单克隆抗体采用所述的用于制备AMH单克隆抗体的质粒经动物免疫形成。

一种所述的AMH单克隆抗体的制备方法，包括：

将所述用于制备AMH单克隆抗体的质粒注射入小鼠尾静脉得到免疫小鼠；

将骨髓瘤细胞与所述免疫小鼠的脾脏细胞进行融合得到杂交瘤细胞；

筛选能够产生AMH单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞；

将所述阳性杂交瘤细胞注射入其它小鼠腹腔进行培养，在所述培养后的小鼠的腹水中得到所述AMH单克隆抗体。