[发明专利]脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原、重组抗原表达基因、重组表达载体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原、重组抗原表达基因、重组表达载体及其制备方法和应用。脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原包括DGP‑1肽段、白介素15蛋白和DGP‑2肽段，所述DGP‑1肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述DGP‑2肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原用于乳糜泄检测时灵敏度好、特异性高且制备成本低，可以测定血清中的IgG‑DGP抗体，特别是能够用于IgA缺陷患者以及婴幼儿人群中潜在乳糜泄患者的检测。

技术领域

本发明涉及乳糜泻诊断技术领域，特别是涉及一种脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原、重组抗原表达基因、重组表达载体及其制备方法和应用。

背景技术

乳糜泻(celiac disease,CD)，又称特发性脂肪泻、成人乳糜泻、非热带口炎性腹泻或麦胶性肠病，是一种遗传易感个体因摄入含麸质蛋白的谷物(小麦、大麦和祼麦)及其制品而诱发的慢性自身免疫性肠病。乳糜泻遗传相关基因研究表明，该疾病与特殊的人类白细胞抗原II型基因密切相关，如定位于染色体6p21上的HLA-DQ2和HLA-DQ8基因。

乳糜泄的诊断方法有基因检测、肠道活检以及血清学检测。基因检测主要用于筛查携带有HLA-DQ2和HLA-DQ8基因型的乳糜泄高危人群，然而受环境影响，只有3％携带这两种基因型的人群会发展成乳糜泄。肠道活检是诊断乳糜泄的黄金标准，世界胃肠病学组织推荐的乳糜泄诊断标准是小肠活检阳性，同时血清学检测阳性可确诊。血清学检测以IgA(免疫球蛋白A)为基础，有已经过时的IgA抗麦胶蛋白抗体(AGA)，以及随后出现的IgA抗肌内膜抗体(anti-EMA)和IgA抗组织转谷氨酰胺酶抗体(anti-tTG)，然而对于IgA缺陷的患者，可能出现血清anti-tTG和anti-EMA假阴性表现。IgG-DGP由于其高敏感性和特异性，可作为选择性IgA缺陷患者最精确的检测手段。特别是在免疫系统尚未发育成熟的婴儿体内，DGP抗体能够比anti-tTG及anti-EMA更早的诊断乳糜泄，高浓度DGP抗体与肠道损伤的严重程度呈正相关。

发明内容

基于此，有必要提供一种灵敏度好、特异性高的可用于乳糜泄诊断的脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原。

一种脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原，包括白介素15蛋白和分别连接于所述白介素15蛋白两端的DGP-1肽段和DGP-2肽段，所述DGP-1肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述DGP-2肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在其中一个实施例中，还包括六聚组氨酸标签和Flag标签，所述白介素15蛋白和分别连接于所述白介素15蛋白两端的DGP-1肽段和DGP-2肽段构成融合蛋白，所述六聚组氨酸标签和所述Flag标签分别连接于所述融合蛋白的两端。

在其中一个实施例中，所述六聚组氨酸标签、DGP-1肽段、白介素15蛋白、DGP-2肽段和Flag标签依次通过连接肽连接。

本发明还提供了一种重组抗原表达基因，包括与上述脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原的氨基酸序列对应的核苷酸序列。

本发明还提供了一种重组表达载体，包括上述重组抗原表达基因和表达载体。

在其中一个实施例中，所述表达载体为pET-21a(+)、pET-28a(+)或pET-30a(+)。

本发明还提供了上述脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原、上述重组抗原表达基因或上述重组表达载体在制备用于诊断乳糜泻的产品中的应用。

本发明还提供了一种乳糜泻诊断试剂盒，包括上述脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原。

在其中一个实施例中，还包括磁微球，所述脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原与所述磁微球偶联，所述磁微球带有氨基基团。