[发明专利]一种检测高毒力鲍曼不动杆菌的试剂盒及其使用方法

说明书

本发明涉及一种检测高毒力鲍曼不动杆菌的试剂盒及其使用方法，属于生物检测技术领域。以鲍曼不动杆菌内一段特异性序列作为标志物，该特异性序列存在于鲍曼不动杆菌内一段包括19个开放读码框的基因序列中，该段包括19个开放读码框的基因序列为高毒力鲍曼不动杆菌特有的；再以标志物特异性序列设计引物，最后基于聚合酶链反应，完成对高毒力鲍曼不动杆菌的定性检测，以弥补现有技术中鲍曼不动杆菌检测方法只能鉴定鲍曼不动杆菌的存在，无法准确、定性的区分各个不同毒力的菌株等问题，从而保证了检测高毒力鲍曼不动杆菌的标志物、试剂盒及使用方法的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种检测高毒力鲍曼不动杆菌的试剂盒及其使用方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

鲍曼不动杆菌为非发酵革兰阴性杆菌，广泛存在于自然界，属于条件致病菌。该菌是医院感染的重要病原菌，主要引起呼吸道感染，也可引发菌血症、泌尿系感染、继发性脑膜炎、手术部位感染、呼吸机相关性肺炎等。由于鲍曼不动杆菌对常用抗生素的耐药率（尤其是碳青霉烯类抗生素）有逐年增加的趋势，因而引起临床医生和微生物学者的密切关注。鲍曼不动杆菌感染的病人多为老年、危重疾病、机体抵抗力弱以及长期使用广谱抗生素的患者。

鲍曼不动杆菌的各个菌株之间存在毒力上的差异，而高毒力的菌株感染常常导致病人死亡率高，而目前临床上只能通过生化反应或者质谱技术鉴定鲍曼不动杆菌的存在，而无法有效区别各个菌株之间的毒力差异，因此，给临床医生的参考价值十分有限。

国家知识产权局于2016年07月27日公开了一种公开号为CN105803041A，名称为“一种鲍曼不动杆菌荚膜染色试剂盒及检测方法”的专利文献，其中，公开了：所述检测方法包括：鲍曼不动杆菌与刚果红染液及黏附剂混合后推制薄片,采用刚果红染色法对鲍曼不动杆菌荚膜进行染色，该发明建立了一套简便、快速、可行的鲍曼不动杆菌毒力快速评估方法，可以实现对临床分离鲍曼不动杆菌荚膜生成情况进行检测，以评估该菌株毒力和治疗难易程度，为临床治疗方案的选择提供了参考。该专利文献中提供了一种鲍曼不动杆菌荚膜染色试剂盒及检测方法，可进行鲍曼不动杆菌毒力快速评估，其基于染色法，属于形态学检测。

发明内容

发明人在研究中发现，高毒力鲍曼不动杆菌基因组中含有一段包括19个开放读码框的基因序列，而该基因序列中含有一段独有的特异性序列，以该特异性序列为靶标（即靶多核苷酸），设计引物，因此，基于这一研究结果，将该特异性序列作为生物标志物并应用于检测高毒力鲍曼不动杆菌的试剂盒中。

本发明的目的在于克服现有技术的不足，而提出了一种检测高毒力鲍曼不动杆菌的试剂盒及其使用方法。在本技术方案中，试剂盒以特异性序列为标志物，再基于聚合酶链反应，完成对高毒力鲍曼不动杆菌的定性检测，以弥补现有技术中鲍曼不动杆菌检测方法只能鉴定鲍曼不动杆菌的存在，无法准确定性的区分各个不同毒力的菌株等问题。

为了实现上述技术目的，提出如下的技术方案：

鲍曼不动杆菌内一段特异性序列作为标志物在制备检测高毒力鲍曼不动杆菌的试剂盒中的应用，所述特异性序列存在于鲍曼不动杆菌内一段包括19个开放读码框的基因序列中；所述特异性序列经检测为阳性，则判断鲍曼不动杆菌为高毒力鲍曼不动杆菌；反之，所述特异性序列经检测为阴性，则判断鲍曼不动杆菌为低毒力鲍曼不动杆菌；

所述包括19个开放读码框的基因序列如SEQ ID NO.1所示；

所述特异性序列如SEQ ID NO.2所示。

一种检测高毒力鲍曼不动杆菌的试剂盒，包括PCR反应液、用于扩增特异性序列SEQ ID NO.2的引物、阳性对照及阴性对照。

进一步的，所述PCR反应液包括Taq聚合酶、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液、氯化镁溶液、氯化钾溶液、曲拉通溶液、甲酰胺溶液以及脱氧核糖核苷三磷酸。

进一步的，所述用于扩增特异性序列SEQ ID NO.2的引物包括上游引物和下游引物，其中，