[发明专利]一种肝脏特异性聚集巨噬细胞的转基因斑马鱼模型在审
| 申请号： | 201910448578.6 | 申请日： | 2019-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN110055277A | 公开（公告）日： | 2019-07-26 |
| 发明（设计）人： | 徐进;温子龙;姜沄沄;王铁男;吴淑婷;陈嘉豪 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 何淑珍;江裕强 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 巨噬细胞 肝脏 斑马鱼 转基因斑马鱼 激光扫描共聚焦 诱导巨噬细胞 整体原位杂交 白细胞介素 斑马鱼胚胎 荧光显微镜 肝脏区域 活体成像 异位表达 组织区域 粒细胞 转基因 染色 表型 成鱼 富集 活体 抗体 显像 增高 造血 养殖 证据 | ||
1.一种肝脏特异性聚集巨噬细胞的转基因斑马鱼模型，其特征在于，包括如下步骤：
（1）通过聚合酶链式反应利用野生型斑马鱼基因组DNA得到斑马鱼肝脏细胞特异性启动子——脂肪酸转运蛋白10a，同时通过聚合酶链式反应利用野生型斑马鱼cDNA得到白细胞介素34基因，将这两部分片段利用DNA连接酶分段连接进入空载pBLK-sv40构建pBLK-fabp10a-il34-sv40质粒，利用显微注射技术将此质粒注射入已标记了的转基因家系Tg(mpeg1: GFP)斑马鱼卵中，然后用白细胞介素34的RNA探针进行原位杂交技术鉴定，观察在瞬时表达情况下白细胞介素34在斑马鱼体内的特异性表达情况，在肝脏瞬时表达白细胞介素34情况下，通过抗体染色鉴定巨噬细胞在肝脏部位特意性聚集情况；
（2）构建Tg (fabp10a:il34)稳定遗传的转基因家系的斑马鱼，即所述可在肝脏中特异性聚集巨噬细胞的动物模型，与Tg (mpeg1: GFP)转基因斑马鱼杂交后，利用白细胞介素34的RNA探针进行原位杂交技术鉴定，在稳定表达情况下白细胞介素34在斑马鱼体内特异性表达情况，然后在肝脏稳定表达白细胞介素34时，用抗体染色鉴定巨噬细胞在肝脏部位特意性聚集情况；
（3）将Tg (fabp10a: il34; mpeg1: GFP)与已做标记的转基因家系Tg( fabp10a:dsRed)杂交，获得受精卵，用激光扫描共聚焦显微镜实时活体成像技术观察在受精后3天到3.5天内巨噬细胞向肝脏区域迁移的过程。
2.根据权利要求1所述肝脏特异性聚集巨噬细胞的转基因斑马鱼模型，其特征在于，所述肝脏中特异性聚集巨噬细胞的表型是由于白细胞介素34在肝脏中过表达引起。
3.根据权利要求1所述肝脏特异性聚集巨噬细胞的转基因斑马鱼模型，其特征在于，所述斑马鱼为
4.根据权利要求1所述肝脏特异性聚集巨噬细胞的转基因斑马鱼模型，其特征在于，所述特异性肝脏中聚集巨噬细胞，表现为巨噬细胞数目仅特异性的在肝脏区域增高，其他组织区域造血组织CHT区域中的巨噬细胞数目不变，同时粒细胞数目不变。
5.根据权利要求1所述肝脏特异性聚集巨噬细胞的转基因斑马鱼模型，其特征在于，步骤（1）中所述已标记了转基因家系Tg (mpeg1: GFP)斑马鱼卵是用绿色荧光蛋白GFP标记了转基因家系Tg (mpeg1: GFP)斑马鱼卵的巨噬细胞。
6.根据权利要求1所述肝脏特异性聚集巨噬细胞的转基因斑马鱼模型，其特征在于，步骤（1）中所述已标记了转基因家系Tg (mpeg1: GFP)斑马鱼卵为单细胞期。
7.根据权利要求1所述的肝脏特异性聚集巨噬细胞的转基因斑马鱼模型，其特征在于，步骤（2）中所述已做标记的转基因家系Tg( fabp10a: dsRed)是用红色荧光蛋白dsRed标记了肝脏细胞的转基因家系Tg( fabp10a: dsRed)。
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