[发明专利]一种维氏气单胞菌的LAMP检测引物组合物及试剂盒

权利要求书

1.一种维氏气单胞菌的LAMP检测引物组合物，其特征在于：包括两条外引物AV-F₃引物和AV-B₃引物、两条内引物AV-FIP引物和AV-BIP引物；所述AV-F₃引物的核苷酸序列为SEQ IDNO.2，所述AV-B₃引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.3，所述AV-FIP引物的核苷酸序列为SEQID NO.4，所述AV-BIP引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.5。

2.如权利要求1所述维氏气单胞菌的LAMP检测引物组合物在制备检测维氏气单胞菌的试剂盒中的应用。

3. 一种检测维氏气单胞菌的试剂盒，其特征在于：包括A溶液，所述A溶液中含有如权利要求1所述维氏气单胞菌的LAMP检测引物组合物、dNTPs、10× lamp buffer、Mg²⁺和BstDNA聚合酶。

4.如权利要求3所述检测维氏气单胞菌的试剂盒，其特征在于，所述A溶液中的所述引物组合物满足如下浓度比例：

所述AV-FIP引物：所述AV-BIP引物：所述AV-F₃引物：所述AV-B₃引物=6 : 6 : 1 : 1 。

5. 如权利要求4所述检测维氏气单胞菌的试剂盒，其特征在于：在所述A溶液中，所述AV-FIP引物的浓度为1.2 µmol/L，所述AV-BIP引物的浓度为1.2 µmol/L，所述AV-F₃引物的浓度为0.2 µmol/L，所述AV-B₃引物的浓度为0.2 µmol/L。

6. 如权利要求3所述检测维氏气单胞菌的试剂盒，其特征在于：在所述A溶液中，所述dNTPs的浓度为1.8 mmol/L，所述Mg²⁺的浓度为3 mmol/L，所述BstDNA聚合酶的浓度320 U/mL，所述10× lamp buffer的浓度为1×。

7.如权利要求3所述检测维氏气单胞菌的试剂盒，其特征在于：还包括B溶液和C试液，所述B溶液为维氏气单胞菌基因组DNA样品液，所述C试液为无菌水。

8.如权利要求7所述检测维氏气单胞菌的试剂盒的使用方法，其特征在于：

按照所述A溶液：待测DNA样品液=22:3的体积比，取所述A溶液与所述待测DNA样品液，混合，配制实验组反应液；

按照所述A溶液：所述B溶液=22:3的体积比，取所述A溶液与所述B溶液，混合，配制阳性对照组反应液；

按照所述A溶液：所述C试液=22:3的体积比，取所述A溶液与所述C试液，混合，配制阴性对照组反应液；

分别使所述实验组反应液、所述阳性对照组反应液和所述阴性对照组反应液在61-65℃下进行LAMP扩增反应，反应时间为30-90分钟；

分别对完成LAMP扩增反应后的所述实验组反应液、所述阳性对照组反应液和所述阴性对照组反应液进行灭活处理，定性检测。

9. 如权利要求8所述检测维氏气单胞菌的试剂盒的使用方法，其特征在于：所述检测维氏气单胞菌的试剂盒还包括D溶液，所述D溶液为SYBR Green I 荧光染料；

所述定性检测的具体步骤为：

按照灭活后的所述实验组反应液：所述D溶液=22:1的体积比，向灭活后的所述实验组反应液中加入所述D溶液；

按照灭活后的所述阳性对照组反应液：所述D溶液=22:1的体积比，向灭活后的所述阳性对照组反应液中加入所述D溶液；

按照灭活后的所述阴性对照组反应液：所述D溶液=22:1的体积比，向灭活后的所述阴性对照组反应液中加入所述D溶液。

10.如权利要求8或9任一项所述检测维氏气单胞菌的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述LAMP扩增反应的反应条件为：反应温度为63℃，反应时间为70分钟。