[发明专利]一种UPLC-MS/MS检测降脂宁颗粒中有效成分含量的方法

权利要求书

1.一种UPLC-MS/MS检测降脂宁颗粒中有效成分含量的方法，其特征在于，所述有效成分为金丝桃苷、二苯乙烯苷、荷叶碱和橙黄决明素中的四种，检测过程包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备：取待检测成分的标准品，以75v%的甲醇为溶剂，配制对照品溶液，使对照品溶液中有效成分的浓度分别为：金丝桃苷2 μg/mL， 二苯乙烯苷3 μg/mL，荷叶碱2 μg/mL，橙黄决明素2μg/mL；

（2）供试品溶液的制备：

称取降脂宁颗粒，研制成粉末状，精密称取100.0 mg转移到棕色样品瓶中，再加入75v%的甲醇5mL，超声溶解，冷却，静置10~20min，随后用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，滤液即为供试品溶液；

（3）标准曲线的绘制：

取对照品溶液，用75v%甲醇稀释，稀释成具有浓度梯度的对照品溶液，以超高效液相色谱-串联质谱联用仪为检测仪器进行检测，色谱条件：Agilent Eclipse Plus C18 2.1×50mm，1.7μm色谱柱，以0.05v%甲酸的水作为流动相A，以0.05v% 甲酸的乙腈作为流动相B进行梯度洗脱，流速0.3 mL/min，进样量5μL，柱温箱40℃，梯度洗脱的具体过程为：0-0.2min，流动相B 10%；0.2-3.2min流动相B 10%-90%；3.2-4.2min，流动相B90%；4.2-4.5min，流动相B90%-10%，4.5-5.0min流动相B 10%；

质谱条件：电喷雾离子源ESI，采用正离子扫描，多反应监测模式，碰撞气是氮气，离子化温度为345℃，气体的流速为120 L/min，

选择正离子扫描，多重反应监测模式时，每个有效成分的保留时间、定量离子对、碎裂电压和碰撞能量如下表所示：

再以有效成分标准品的浓度为横坐标、该有效成分的定量离子的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到每个有效成分的标准曲线和标准曲线线性方程；

（4）待测品的检测：

将供试品溶液按照步骤（3）的色谱和质谱条件进行测定，记录每个有效成分的定量离子的峰面积，代入对应有效成分的标准曲线线性方程中即得降脂宁颗粒中相应有效成分的浓度。

2.根据权利要求1所述UPLC-MS/MS检测降脂宁颗粒中有效成分含量的方法，其特征在于，步骤（2）中对照品溶液的具体配制过程如下：取待测成分的标准品2.0 mg 于10 mL的容量瓶中，用75%的甲醇溶液进行溶解并定容，摇匀，即可得0.2 mg/mL的标准溶液；再分别精确移取0.2 mg/mL的标准溶液于容量瓶中，其中，金丝桃苷，二苯乙烯苷，荷叶碱，橙黄决明素标准溶液的体积分别为0.5mL，0.75mL，0.5mL，0.5mL；用75v%的甲醇溶液定容，摇匀，可制得对照品溶液。

3.根据权利要求1所述UPLC-MS/MS检测降脂宁颗粒中有效成分含量的方法，其特征在于，以步骤（3）中对照品溶液为200%，并依次稀释为160%，120%，100%，50%，20%，10%，1%作为系列浓度梯度。

4.根据权利要求1所述UPLC-MS/MS检测降脂宁颗粒中有效成分含量的方法，其特征在于，步骤（3）中每个有效成分的标准曲线线性方程为：金丝桃苷：Y=88.34X-1250；二苯乙烯苷：Y=34.61X+774.34；荷叶碱：Y=1423.3X+153724；橙黄决明素：Y=69.95X+1892.9。