[发明专利]一种阳离子型转染试剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种阳离子型转染试剂，其特征在于，所述的阳离子型转染试剂包括聚乙烯亚胺5-15ng/mL、阳离子聚丙烯酰胺3-10ng/mL、阳离子脂质体10-30ng/mL、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵0.1-10ng/mL和维生素D1-5ng/mL；

所述的阳离子脂质体为二油酰磷脂酰乙醇胺、双十二烷基二甲基溴化铵和双十八烷基氨基甘氨酰羧精胺中的任一种。

2.根据权利要求1所述的阳离子型转染试剂，其特征在于，所述的阳离子脂质体为二油酰磷脂酰乙醇胺。

3.一种权利要求1-2任意一项所述的阳离子型转染试剂的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：

(1)将聚乙烯亚胺和阳离子聚丙烯酰胺按比例溶于PBS缓冲液中，搅拌混合均匀，过滤，得到混合液1；

(2)将阳离子脂质体和维生素D按比例溶于85％的乙醇水溶液中，搅拌混合均匀，过滤，得到混合液2；

(3)将步骤(1)得到的混合液1和步骤(2)得到的混合液2等体积混匀，加入脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵，搅拌混合均匀，过滤，灭菌，得到阳离子型转染试剂。

4.一种权利要求1-2任意一项所述的阳离子型转染试剂在细胞转染中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的应用包括以下步骤：

A.备转细胞的处理：吸去备转细胞的培养基，用PBS清洗细胞，加入无血清培养基，得到处理后的备转细胞；

B.转染试剂-核酸复合物的制备：将权利要求1-2任意一项所述的阳离子型转染试剂或由权利要求3制备得到的阳离子型转染试剂和核酸混合，得到混合液，用无血清培养基稀释混合液，震荡混匀，得到转染试剂-核酸复合物；

C.细胞转染：将步骤A得到的处理后的备转细胞和步骤B得到的转染试剂-核酸复合物混合均匀，培养，将培养基更换为完全培养基进行传代培养，得到转染后的细胞。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤A中备转细胞浓度为1-3×10⁵个/mL。