[发明专利]表达16型蓝舌病病毒VP2基因的重组病毒及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201910454911.4 | 申请日： | 2019-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN110117579B | 公开（公告）日： | 2021-12-14 |
| 发明（设计）人： | 金宁一;李昌;张克龙;许汪;杜寿文;田明尧;鲁会军;李霄;郝鹏飞;宋利娜;姜宇航 | 申请（专利权）人： | 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/863;C12N15/46;A61K39/15;A61P31/14;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京一枝笔知识产权代理事务所(普通合伙) 11791 | 代理人： | 张庆瑞 |
| 地址： | 130000 吉林省长*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达 16 型蓝舌病 病毒 vp2 基因 重组 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种表达16型蓝舌病病毒VP2基因的重组病毒，其特征在于，包括病毒载体和包装于所述病毒载体中的带有16型蓝舌病病毒VP2基因的穿梭质粒，所述16型蓝舌病病毒VP2基因的序列如SEQ ID NO.1所示；
所述病毒载体为痘苗病毒载体，所述穿梭质粒为痘苗病毒穿梭质粒pSTKE；
所述16型蓝舌病病毒VP2基因的上游还具有kozak序列。
2.一种表达16型蓝舌病病毒VP2基因的重组病毒的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：提供含有16型蓝舌病病毒VP2基因的质粒，利用扩增引物对16型蓝舌病病毒VP2基因进行PCR扩增，将扩增得到的16型蓝舌病病毒VP2基因插入到穿梭质粒中得到重组穿梭质粒，将所述重组穿梭质粒和病毒转染至细胞中，2～3天后筛选收集得到所述表达16型蓝舌病病毒VP2基因的重组病毒。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述扩增引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，所述下游引物的序列如SEQ ID NO.3所示。
4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述将扩增得到的16型蓝舌病病毒VP2基因插入到穿梭质粒中的步骤包括：将扩增得到的16型蓝舌病病毒VP2基因与pEasy克隆载体连接得到pEasy-VP2，然后通过双酶切和连接将16型蓝舌病病毒VP2基因连接到穿梭质粒中得到重组穿梭质粒。
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述双酶切使用的酶为Xba I和SalI。
6.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述病毒为痘苗病毒天坛株，所述穿梭质粒为痘苗病毒穿梭质粒pSTKE。
7.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述细胞为BHK-21细胞。
8.一种权利要求1所述的表达16型蓝舌病病毒VP2基因的重组病毒在制备蓝舌病疫苗中的应用。
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