[发明专利]癌胚抗原CEA定量检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物，其中，

所述抗试剂的制备步骤为：将癌胚抗原CEA抗体分别与异硫氰酸荧光素和碱性磷酸酯酶偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体和碱性磷酸酶标记的CEA包被抗体，将异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体和碱性磷酸酶标记的CEA标记抗体加入抗试剂缓冲液中，充分搅拌；

所述磁微粒试剂的制备步骤为：清洗羧基磁珠，将异硫氰酸荧光素单克隆抗体与羧基磁珠偶联，清洗并保存。

2.根据权利要求1所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体的制备步骤进一步为：

将异硫氰酸荧光素加入抗试剂缓冲液中，配置异硫氰酸荧光素溶液，使异硫氰酸荧光素溶液的最终浓度为1.0～5.0mg/mL；

将质量比为1.1:1的向异硫氰酸荧光素溶液和癌胚抗原CEA充分混匀10～20小时，充分反应后加入碳酸氢盐缓冲液进行平衡，然后凝胶层析分离纯化。

3.根据权利要求1所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的CEA标记抗体的制备步骤进一步为：

将碱性磷酸酶加入抗试剂缓冲液中，配置碱性磷酸酶溶液，使碱性磷酸酶溶液的最终浓度为1.0～3.0mg/mL；

将摩尔比为1.5:1的碱性磷酸酶溶液和癌胚抗原CEA充分混匀14～24小时，充分反应后加入含有表面活性剂的Tris盐缓冲液进行平衡，然后凝胶层析分离纯化；

所述Tris盐缓冲液的组分及含量如下：Tris缓冲液12.12mg，氯化钠5.82mg。

4.根据权利要求1所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂的制备步骤进一步为：

步骤1：对羧基磁珠清洗浓缩液进行磁场分离，待羧基磁珠沉降后弃上清；

步骤2：向所述步骤1得到的溶液中加入2～5倍于羧基磁珠体积的磁微粒缓冲液，混匀20～30min；

步骤3：对所述步骤2得到的溶液进行磁场分离，待羧基磁珠沉降后弃上清，最后得到10～50mg/mL的羧基磁珠溶液；

步骤4：将质量比为100:1的羧基磁珠溶液和异硫氰酸荧光素单克隆抗体充分混匀反应18h；

步骤5：对所述步骤4得到的溶液进行磁场分离，待羧基磁珠沉降后使用磁微粒缓冲液清洗，最后得到10mg/mL的磁微粒试剂。

5.根据权利要求1至4中任一所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述发光底物的组分为APS-5和发光底物缓冲液，体积比为1:4～10，其中，

所述发光底物缓冲液的组分及含量为：Tris缓冲液12.12g/L，氯化钠5.82g/L，光泽精0.03g/L。

6.根据权利要求1至4中任一所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述抗试剂缓冲液的组分及含量为：

7.根据权利要求1至4中任一所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述校准品和质控品的制备步骤为：使用校准品缓冲液溶解癌胚抗原CEA，得到0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL和150ng/mL的校准品以及10ng/mL、50ng/mL的质控品，其中，

所述校准品缓冲液的组分及含量为：血清500g/L，四环素0.01～0.05g/L，硫酸新霉素0.1～0.5g/L。

8.根据权利要求1-4中任一所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括清洗液，所述清洗液的组分及含量为：

9.一种如权利要求1至8中任一所述的试剂盒作为体外诊断试剂的应用。