[发明专利]癌胚抗原CEA定量检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种癌胚抗原CEA定量检测试剂盒及其应用，涉及生物技术领域。所述癌胚抗原CEA定量检测试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物，其中，所述抗试剂的制备步骤为：将癌胚抗原CEA抗体分别与异硫氰酸荧光素和碱性磷酸酯酶偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体和碱性磷酸酶标记的CEA包被抗体，将异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体和碱性磷酸酶标记的CEA标记抗体加入抗试剂缓冲液中，充分搅拌；所述磁微粒试剂的制备步骤为：清洗羧基磁珠，将异硫氰酸荧光素单克隆抗体与羧基磁珠偶联，清洗并保存。本发明既能提高检测灵敏度及可靠性，又能降低成本。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种癌胚抗原CEA定量检测试剂盒及其应用。

背景技术

癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)是一种具有人类胚胎抗原特异决定簇的癌胚抗原，是重要的肿瘤相关抗原，早期胎儿中由内胚层衍生而来，由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝细胞所合成。1965年，Gold和Freedman首先从胎儿及结肠癌组织中发现，故将其称为癌胚抗原。CEA的编码基因位于19号染色体，是一种分子量为22KD的多糖蛋白复合物，45％为蛋白质。

CEA属于非器官特异性肿瘤相关抗原，主要存在于直、结肠癌组织及胎儿肠粘膜内，分泌CEA的肿瘤大多位于空腔脏器，如胃肠道、呼吸道、泌尿道等。正常情况下，CEA经胃肠道代谢，而由肿瘤细胞分泌产生的CEA进入局部体液及血液和淋巴循环中，因此在上述癌症的血清及胸、腹水、消化液内可出现CEA异常增高。

CEA是一种广谱肿瘤标志物，常与其他肿瘤标志物结合检测。在临床上，当CEA大于60μg/L时，可见于结肠癌、直肠癌、胃癌和肺癌。原发性结肠直肠癌在早期未转移时，CEA阳性率为45％～80％左右，已转移的患者其CEA的浓度和阳性检出率均升高。CEA的测定可作为观察疗效的依据之一。CEA值升高，表明有病变残存或进展。如肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌患者，其血清CEA量会明显升高，大多显示为肿瘤浸润，其中约70％为转移性癌。

目前，国内癌胚抗原CEA临床检测主要以国外进口试剂和免疫组化试剂为主，国外进口试剂价格非常昂贵，给患者带来很大的经济负担，不利于在基层普及。具有自主知识产权的国产癌胚抗原CEA免疫化学发光检测试剂盒目前还较少，检测灵敏度较低、线性窄、特异性较差，也不利于高通量的全自动检测。

发明内容

本发明提供一种既能提高检测灵敏度及可靠性，又能降低成本的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒及应用。

为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：

一种癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物，其中，

所述抗试剂的制备步骤为：将癌胚抗原CEA抗体分别与异硫氰酸荧光素和碱性磷酸酯酶偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体和碱性磷酸酶标记的CEA标记抗体，将异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体和碱性磷酸酶标记的CEA标记抗体加入抗试剂缓冲液中，充分搅拌；

所述磁微粒试剂的制备步骤为：清洗羧基磁珠，将异硫氰酸荧光素单克隆抗体与羧基磁珠偶联，清洗并保存。

进一步的，所述异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体的制备步骤进一步为：

将异硫氰酸荧光素加入抗试剂缓冲液中，配置异硫氰酸荧光素溶液，使异硫氰酸荧光素溶液的最终浓度为1.0～5.0mg/mL；

将质量比为1.1:1的向异硫氰酸荧光素溶液和癌胚抗原CEA充分混匀10～20小时，充分反应后加入碳酸氢盐缓冲液进行平衡，然后凝胶层析分离纯化。

进一步的，所述碱性磷酸酶标记的CEA标记抗体的制备步骤进一步为：