[发明专利]一种重组甘油磷酸氧化酶表达载体及其建立方法有效
| 申请号： | 201910455900.8 | 申请日： | 2019-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN110184289B | 公开（公告）日： | 2021-03-23 |
| 发明（设计）人： | 高国生;董飞波;孙毅;华馨;张文宇;杨锦勋 | 申请（专利权）人： | 桐乡杜创三众生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/53;C12N1/21;C12N9/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京苏科专利代理有限责任公司 32102 | 代理人： | 蒋慧妮 |
| 地址： | 314000 浙江省嘉兴市桐*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 甘油 磷酸 氧化酶 表达 载体 及其 建立 方法 | ||
1.重组甘油磷酸氧化酶表达载体的构建方法，其特征在于：所述表达载体由甘油磷酸氧化酶表达载体构建而来，在核糖体结合位点与起始密码子之间插入基因表达调节元件，包括如下步骤，
S1、甘油磷酸氧化酶表达载体的构建；
S11、合成甘油磷酸氧化酶基因片段，所述甘油磷酸氧化酶基因序列如SEQ ID NO.1所示；
S12、选取pET系列表达质粒；
S13、将S11中的甘油磷酸氧化酶基因片段插入到S12中的表达质粒中；
S2、在所述S1构建的甘油磷酸氧化酶表达载体中采用定点突变的方式插入基因表达调节元件获得重组的甘油磷酸氧化酶表达载体；所述基因表达调控元件为胞嘧啶和鸟嘌呤组成的核苷酸序列，所述S2中基因表达调节元件序列为CCGGGG；所述基因表达调节元件插入位点为核糖体结合位点与起始密码子之间。
2.如权利要求1所述的重组甘油磷酸氧化酶表达载体的构建方法，其特征在于：所述S13中包括如下步骤：
S131、对S11中的甘油磷酸氧化酶基因片段及S12中的表达质粒进行双酶切；
S132、对经过酶切后的甘油磷酸氧化酶基因片段和表达质粒进行纯化；
S133、采用连接酶将纯化后的甘油磷酸氧化酶基因片段和质粒片段进行连接。
3.如权利要求2所述的重组甘油磷酸氧化酶表达载体的构建方法，其特征在于：所述S11中甘油磷酸氧化酶基因来源于Aerococcus viridans菌株。
4.如权利要求2所述的重组甘油磷酸氧化酶表达载体的构建方法，其特征在于：所述S12中pET系列表达质粒为pET28a或pET24d表达质粒。
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