[发明专利]一种新型溶瘤病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种新型溶瘤病毒及其制备方法和应用，所述溶瘤病毒基因组中包含抗人CTLA4抗体和人IL‑21的基因编码序列，并能表达抗人CTLA4抗体和人IL‑21，将免疫治疗的抑瘤效果与病毒治疗的溶瘤效应有效结合起来，制备了一种可高效表达αCTLA4‑Fc(ALIE)‑IL21基因溶瘤病毒，在溶瘤病毒发挥溶瘤效应裂解肿瘤细胞的同时，通过大量表达αCTLA4‑Fc(ALIE)杀伤肿瘤微环境的调节性T细胞（Regulatory T Cells,Treg），或阻断其抑制效应，从而上调肿瘤微环境的免疫应答，提升抗肿瘤效应；同时，该溶瘤病毒大量表达IL21，进一步激活肿瘤微环境中T细胞与NK细胞的杀伤功能，发挥多重的抗肿瘤效果。相对于单纯的基因疗法或者病毒疗法增强了其对恶性肿瘤的杀伤能力。

技术领域

本发明属生物医学技术领域，具体涉及包含经修饰或经改造的高杀伤性抗人CTLA4抗体以及人IL-21基因的新型溶瘤病毒和所述溶瘤病毒的制备方法以及在抗肿瘤方面的应用。

背景技术

由于标准肿瘤治疗方案在晚期肿瘤治疗中的有限的治疗效果以及严重副作用，靶向肿瘤的溶瘤病毒在近几十年里引起了极大的关注。溶瘤病毒得益于其自身可选择性的在肿瘤局部感染并裂解肿瘤细胞的特性，正在越来越多的成为抗肿瘤的首选。溶瘤病毒的肿瘤选择性可以是本身的肿瘤趋向性，也可以是基因修饰的结果。溶瘤病毒可作用于多个细胞通路，以此减少肿瘤的抗性，还可以诱导不同形式的细胞死亡。另外，溶瘤病毒可以打破肿瘤微环境的免疫耐受，诱导长期的肿瘤特异性免疫应答。溶瘤病毒可特异性的转运治疗性蛋白进入肿瘤组织，伴随病毒的进一步复制增加在恶性肿瘤细胞中表达水平。另外，溶瘤病毒可以同化疗与放疗联合使用。

近几十年来，溶瘤病毒治疗以其突出的效果引起了广泛关注，对其的相关研究也取得了长足的进展。目前腺病毒(adenovirus)、单纯疱疹病毒-1 (herpes simplex virus-1，HSV-1)、新城疫病毒等已经相继被改造成溶瘤病毒。2006年，溶瘤腺病毒产品(oncorine)在中国已经用于临床治疗，主要用于治疗鼻咽癌等。该溶瘤病毒是将人5型腺病毒E1B-55kD区删除，使该病毒可在p53基因突变的癌细胞中繁殖并杀伤宿主细胞，产生溶瘤治疗作用。但是，临床数据显示这种基于p53基因突变的溶瘤腺病毒的治疗效果并不十分理想。Jennerex的JX-594是美国生物治疗公司的一种经过修改的牛痘病毒。在2013年完成的二期临床试验中，发现原发性肝癌患者在注射了高剂量的病毒后，其生命延长时间的中间值可达到14 .1个月，而接受低剂量注射的患者只有6 .7个月的生命延长期。BioVex生物技术公司研发的基因工程化的单纯疱疹病毒OncoVEX GM-CSF已于2015年10月通过了FDA的批准，成为世界首个上市的溶瘤病毒产品。OncoVex在选择性地杀灭肿瘤细胞同时，表达分泌GM-CSF，启动机体产生系统的免疫应答，杀伤剩余局部肿瘤细胞及其转移的肿瘤细胞。2009年BioVex公布的一项转移性黑色素瘤II期试验的结果显示，50名患者中有26％对治疗有反应，更有8名患者完全恢复健康。2013年3月，安进(Amgen)公布了OncoVex的治疗数据，临床证明它能成功地让晚期患者的肿瘤缩小，在超过400名试验患者的III期研究中，OncoVex要比同类其他药物更加有效。溶瘤病毒的确正在成为治疗肿瘤的利器，但溶瘤病毒依然需要进一步地开发和改进，来增强局部及全身性抗肿瘤作用，并减少毒副作用。

为了增强溶瘤病毒的抗肿瘤效应，国际上采用的主要策略之一是“基因-病毒治疗”，即将外源性治疗基因导入溶瘤病毒，包括诱导细胞凋亡基因、靶向肿瘤微环境的基因和免疫调节基因等。这种策略不仅在病毒治疗研究领域开辟了新途径，也为癌症的基因治疗提供了新的载体，已经被广泛应用于肿瘤生物治疗研究。