[发明专利]一种类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的原代培养方法有效
| 申请号： | 201910458872.5 | 申请日： | 2019-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN110117570B | 公开（公告）日： | 2020-03-10 |
| 发明（设计）人： | 潘继红;王士冠;王林 | 申请（专利权）人： | 山东省医药生物技术研究中心（山东省病毒研究所） |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 郑平 |
| 地址： | 250062 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 类风湿性关节炎 滑膜成 纤维 细胞 培养 方法 | ||
1.一种类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的原代培养方法，所述方法包括：
将经预处理后的滑膜组织充分破碎；向其中加入Ⅲ型胶原酶和Ⅱ型胶原酶；Ⅲ型胶原酶的浓度为0.2~0.6 μg/ml，Ⅱ型胶原酶的浓度为10~30 μg/ml，滑膜组织与Ⅲ型胶原酶和Ⅱ型胶原酶的面积体积比为0.3~0.6cm2：2~3ml：200~400μl；
培养消化后打散成单个细胞；
过滤后将滤液离心取下层沉淀接种至DMEM高糖培养基中贴壁培养；
采用自然纯化法和反复贴壁法纯化细胞即得类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞。
2.如权利要求1所述的一种原代培养方法，其特征在于，所述预处理方法包括将浸泡于生理盐水中的滑膜组织取出在无菌状态下使用PBS冲洗，去除滑膜组织中的脂肪和软骨。
3.如权利要求1所述的一种原代培养方法，其特征在于，破碎方法为剪碎。
4.如权利要求1所述的一种原代培养方法，其特征在于，破碎方法为剪碎至＜0.5mm。
5.如权利要求1所述的一种原代培养方法，其特征在于，Ⅲ型胶原酶的浓度为0.5 μg/ml。
6.如权利要求1所述的一种原代培养方法，其特征在于，Ⅱ型胶原酶的浓度为20 μg/ml。
7.如权利要求1所述的一种原代培养方法，其特征在于，滑膜组织与Ⅲ型胶原酶和Ⅱ型胶原酶的面积体积比为0.5cm2：3ml：300μl。
8.如权利要求1所述的一种原代培养方法，其特征在于，向其中加入Ⅲ型胶原酶和Ⅱ型胶原酶后反复吹打2~3min。
9.如权利要求1所述的一种原代培养方法，其特征在于，所述培养消化具体方法为：置于37℃，5% CO2细胞培养箱消化培养3~6h；
所述打散成单个细胞具体方法为采用吹打方式进行。
10.如权利要求1所述的一种原代培养方法，其特征在于，DMEM高糖培养基中还含有1%双抗和10%FBS。
11.如权利要求1所述的一种原代培养方法，其特征在于，所述类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞为3-6代培养细胞。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东省医药生物技术研究中心（山东省病毒研究所），未经山东省医药生物技术研究中心（山东省病毒研究所）许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910458872.5/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
