[发明专利]硫酸化可德兰多糖的应用

说明书

本发明公开了硫酸化可德兰多糖作为树突状细胞疫苗佐剂的应用，克服单纯树突状细胞疫苗应用的缺点，获得一种以硫酸化可德兰多糖为佐剂的树突状细胞疫苗，并将其应用于H22肝癌模型小鼠的免疫治疗中，为多糖用作疫苗佐剂的研究提供理论基础，为临床肝癌免疫疗法提供新的治疗策略。本发明的树突状疫苗体外经过肿瘤细胞裂解物致敏，同时又经过硫酸化可德兰多糖进一步免疫活化，使树突状细胞的抗原递呈能力增强，接种小鼠后，在小鼠体内通过高表达MHCI、MHCII，促进CD8⁺T细胞浸润到肿瘤组织内并发挥杀伤肿瘤细胞的效果。

技术领域

本发明涉及一种硫酸化可德兰多糖的应用。属于医药技术领域。

背景技术

可德兰多糖(curdlan)是由产碱杆菌(Alcaligenesfaecalis)发酵产生的一种胞外多糖，具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗凝血等活性。但由于其难以溶于水、乙醇等大多数有机溶剂，体内活性的研究及应用受到限制。将curdlan进行硫酸化修饰得到的产物硫酸化可德兰多糖(curdlan sulfate，CURS)，极大地改善了curdlan溶解性。体外实验发现CURS可活化小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow derived dedritic cells，BMDCs)及小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞；体内用于乙肝疫苗佐剂接种于BALB/c小鼠，可以增强乙肝疫苗的免疫原性，提高小鼠体内anti-HBs水平，诱导机体产生Th1型免疫反应。

树突状细胞(DC)是调节机体先天性免疫与适应性免疫的重要抗原递呈细胞，其成熟状态及产生的细胞因子可影响T细胞亚群的分化。经肿瘤相关抗原(TAA)或肿瘤细胞裂解物冲击致敏的DC疫苗可诱导机体产生抗原特异性免疫反应，启动细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答，发挥杀伤肿瘤细胞的作用。已有研究发现经致敏的DC疫苗对肝癌治疗表现出一定的安全性和疗效。但由于多数TAA是机体自身蛋白成分，单纯的TAA产生的免疫刺激信号难以激发机体先天性免疫反应，不易通过诱导DC的成熟与活化启动TAA特异性细胞免疫应答，因而难以打破肿瘤微环境的免疫耐受，降低了TAA致敏DC疫苗的效果。故DC的完全成熟及活化很可能需要除肿瘤抗原以外的其它信号刺激，而通过在DC疫苗中加入适当的佐剂提高疫苗的疗效已被证实是一种行之有效的方法。

发明内容

本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种硫酸化可德兰多糖的应用。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

硫酸化可德兰多糖作为树突状细胞疫苗佐剂的应用。

作为优选的技术方案之一，硫酸化可德兰多糖在树突状细胞疫苗中的浓度为100μg/mL。

作为优选的技术方案之一，硫酸化可德兰多糖的重均分子量(Mw)为30.66kDa，硫含量(质量含量)为14.32％，其结构式如下所示：

作为进一步优选的技术方案之一，所述硫酸化可德兰多糖的制备方法如下：将干燥的可德兰多糖(购自Sigma)溶于DMSO中，搅拌加热至65℃，加入三氧化硫-吡啶(购自Sigma)粉末，反应1小时；待反应结束后，冷却至室温，加入含质量浓度5％醋酸钠的甲醇溶液，待白色沉淀析出后，经离心收集滤液；采用截留分子量为3kDa的超滤膜进行超滤浓缩，收集超滤液，经冷冻干燥后即得；其中，可德兰多糖、DMSO、三氧化硫-吡啶粉末、含5％醋酸钠的甲醇溶液的质量体积比为1g：100mL：2.5g：500mL；化学反应式如下：

一种树突状细胞疫苗，包含佐剂，所述佐剂为硫酸化可德兰多糖。

作为优选的技术方案之一，所述佐剂在树突状细胞疫苗中的浓度为100μg/mL。

作为优选的技术方案之一，硫酸化可德兰多糖的重均分子量(Mw)为30.66kDa，硫含量为14.32％，其结构式如下所示：