[发明专利]RFP标记小细胞肺癌细胞系及其建立和应用

说明书

本发明公开了一种RFP标记小细胞肺癌细胞系及其建立和应用。以小细胞肺癌LTEP‑P细胞株为母细胞，转染包装有表达RFP的pLEIN逆转录病毒，再经G418抗性筛选，获得稳定持续表达RFP的小细胞肺癌LTEP‑P细胞系。该RFP标记小细胞肺癌LTEP‑P细胞系肿瘤特性稳定，具有特异性胸腔内高转移的特点，能够稳定持续表达RFP使得其易于被观察，便于在肺癌转移的各阶段进行实时显示、跟踪、计算和测量等研究工作。

技术领域

本发明属于细胞系领域，具体涉及小细胞肺癌细胞系及其建立和应用。

背景技术

肺癌是发病率最高的恶性肿瘤，是癌症防治的重点。肺癌按组织病理学可以分为小细胞肺癌(Small-cell lung cancer，SCLC)和非小细胞肺癌(non-small celllungcancer,NSCLC)。小细胞肺癌的癌细胞多为类圆形或菱形，胞浆少，类似淋巴细胞，可能是起源于神经外胚层的Kulchitsky细胞或者嗜银细胞。胞浆中含有神经内分泌颗粒，具有内分泌和化学受体功能，能分泌多种肽类物质，可引起类癌综合症。流行病学统计显示：小细胞肺癌约占所有肺癌总数的15％左右；未经治疗的小细胞肺癌患者的中位生存期仅为2到3个月。小细胞肺癌的发病与烟草吸食密切相关。因此，在东欧和亚洲等烟草消费量大的地区，小细胞肺癌的发病率长期保持在较高水平。

在临床上，小细胞肺癌虽然对化疗较敏感，但相比较其他类型肺癌而言，小细胞肺癌在临床上表现为肿瘤侵染性强，具有快速生长、早期转移的特点，其发生转移的时间早，转移率高，病程进展快，预后差，长期生存率很低。小细胞肺癌几乎可以向全身各个脏器进行转移，尤其以中枢神经系统、骨骼、肝脏等最为好发。90％以上的小细胞肺癌患者在就诊时就已经发生胸腔内转移(纵隔淋巴结或肺内转移)，2/3以上的患者甚至出现脑、骨、肝等远处转移。因此，肿瘤转移成为小细胞肺癌治疗所面临的棘手问题。

肿瘤转移是恶性肿瘤的基本生物学特征之一，高达95％以上的小细胞肺癌患者最终将因肿瘤转移或疾病复发而死亡。因此，探索小细胞肺癌侵袭转移与复发的机制，寻求有效抑制小细胞肺癌转移与复发的药物具有重要意义。目前，人们对肿瘤转移过程，特别是早期过程的认识和了解仍十分欠缺，只从肿瘤患者临床观察中积累资料或寻找线索是相当有限的。要想了解肿瘤转移早期阶段所发生的各种改变及其分子机理，从而有效地进行干预非常困难。而任何新的肿瘤防治方法和措施(包括新的抗癌药物、手术方法、射线剂量及投照部位和方法等)未经动物实验便在肿瘤患者身上试用是不道德的甚至是违法的。因此，肿瘤细胞模型和动物模型在肿瘤转移机理的基础研究及抗癌新方法的疗效观察和评估中是绝对不可缺少的。就小细胞肺癌而言，建立高转移小细胞肺癌细胞模型和动物模型是研究小细胞肺癌的复发与转移规律、评价抗小细胞肺癌药物疗效的基础。

目前，对于小细胞肺癌细胞的转移研究主要集中在骨转移、脑转移等远处转移，研究小细胞肺癌的特异性胸腔转移对于小细胞肺癌的早期诊断可能具有特别重要的潜在意义，而且对于小细胞肺癌的特异性转移机制的研究也有重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种红色荧光蛋白(Red Fluorescent Protein,RFP)标记小细胞肺癌LTEP-P细胞系及其建立和应用。该RFP标记小细胞肺癌LTEP-P细胞系肿瘤特性稳定，具有特异性胸腔内高转移性的特点，能够稳定持续表达红色荧光蛋白使得其易于被观察，便于在肺癌转移的各阶段进行实时显示、跟踪、计算和测量等研究工作。

为此，本发明采取了以下技术方案：

一种RFP标记小细胞肺癌LTEP-P细胞系，是以小细胞肺癌LTEP-P细胞株为母细胞，转染包装有RFP的pLEIN逆转录病毒，再经G418抗性筛选，获得稳定持续表达红色荧光蛋白(RFP)的小细胞肺癌LTEP-P细胞系。

所述RFP标记小细胞肺癌LTEP-P细胞系，又记为LTEP-P-RFP肿瘤细胞，呈近于圆形，透亮，具有强的体外成瘤能力和特异胸腔内高转移性。