[发明专利]一种维生素甲萘醌-7的提纯方法

说明书

本发明公开一种维生素甲萘醌‑7的提纯方法，所述方法为：先在MK‑7发酵液中加入适量絮凝剂絮凝沉淀，通过板框过滤，去除大部分水溶性物质。烘干滤渣，粉碎，得到干菌粉。再利用溶剂提取干菌体中的MK‑7，提取液再通过大孔树脂吸附纯化，色谱填料纯化，溶剂结晶，得到高纯度的MK‑7纯品。本发明的方法解决了现有工艺填料无法重复利用，生产成本高的问题，便于工业化生产。

技术领域

本发明涉及化合物提纯领域，尤其涉及一种维生素甲萘醌-7的提纯方法。

背景技术

由于维生素K具有促进凝血的作用,又被称为凝血维生素。近半个世纪以来，人们对维生素K的认识仅限于其对凝血系统的影响，直到1960年Bouckaert发现维生素K可以促进兔子的骨折愈合。1975年，Pettifor等首次提出维生素K参与人体骨代谢的假说之后，人们对维生素K在骨骼新陈代谢的作用才有了深入的认识。

维生素K族包括数个脂溶性的2-甲基-1,4-萘醌衍生物。天然的维生素K包括维生素K1(即叶绿醌)和维生素K2(即甲萘醌类)，其以在2-甲基-1,4-萘醌环状结构的3号位置上的亲脂性侧链为特征。叶绿醌的侧链是确定长度的不饱和烃链，甲萘醌的侧链则是不确定长度的不饱和烃链(维生素K1即叶绿醌为一种化合物，维生素K2为一系列化合物)。

维生素K2(甲萘醌-7)是维生素K2的一个类型，即维生素K2侧链上含有7个异戊二烯单元，其是一种脂溶性维生素，是人体中不可缺少的重要维生素之一。

专利公开号为CN104262129A的发明专利公开了一种从纳豆枯草芽孢杆菌中提纯维生素甲萘醌-7的方法。该方法将纳豆菌发酵液喷雾干燥,用溶剂提取或者浸溶纳豆菌发酵液喷干粉，获得浸溶液。浸溶液浓缩得到浸膏，浸膏通过柱层析，并进行梯度或等度洗脱，收集液浓缩，得到维生素甲萘醌-7。最后将维生素甲萘醌-7粗品结晶提纯，得到维生素甲萘醌-7(MK-7)纯品。

专利公开号为CN106631748A的发明专利则公开了一种分离纯化纳豆芽孢杆菌中维生素K2的方法。将纳豆芽孢杆菌发酵液离心获得菌体，烘干后，溶剂提取，提取蒸干后用极性溶剂重新溶解，通过大孔树脂吸附纯化后，再经过分子量排阻层析柱纯化，最后溶剂洗脱，再经过反相硅胶柱分离。最后结晶得到高纯度维生素K2。

上述两篇专利文献采用离心或者喷雾的方法对发酵液进行固液分离，由于喷雾干燥是在高温下进行操作，导致产品可能存在降解；同时，若直接将发酵液进行喷雾，没有进行过滤处理，则发酵液中大量水溶性的杂质没有分离，一起喷雾成粉后提高后续分离的难度。另外，采用离心操作，由于维生素K2菌体很细，离心的转速需求高。由于高转速离心机生产规模小，导致产品处理量小，难以工业化生产。

另外，上述两篇专利中，需要通过硅胶纯化工艺才能获得高纯度MK-7，由于维生素K2中含有大量的杂质，导致硅胶难以通过高温处理再重复利用。因此，维生素K2采用硅胶纯化存在生产成本高，无法重复利用等缺点。

发明内容

为了克服现有技术不足，本发明的目的是提供一种操作简单，条件温和，生产成本低的维生素甲萘醌-7的提纯方法。

为实现上述目的，发明人提供了一种维生素甲萘醌-7的提纯方法，所述提纯方法包括以下步骤：

10)在纳豆芽孢杆菌发酵液中加入絮凝剂搅拌混合均匀,静置絮凝沉淀后进行板框过滤，将过滤后的菌渣在60-100℃下烘干、粉碎、得到干菌体；

20)将步骤10)得到的干菌体采用第一有机溶剂搅拌提取后，提取液采用大孔吸附树脂吸附，然后采用第二有机溶剂洗涤大孔吸附树脂，再用第三有机溶剂洗涤大孔吸附树脂，收集纯度大于50％的维生素甲萘醌-7的大孔吸附树脂洗脱液；

30)将步骤20)得到的所述维生素甲萘醌-7的大孔吸附树脂洗脱液减压浓缩后，采用第四有机溶剂溶解再进行过色谱填料层析，然后采用第五有机溶剂洗脱，收集纯度大于90％的维生素甲萘醌-7的色谱填料洗脱液：