[发明专利]一种具有缓解焦虑、改善睡眠的发酵乳制备方法

权利要求书

1.一种发酵乳制备方法，其特征在于，所述方法包括：将短乳杆菌GDMCC No.60605与保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌接种到含有L-谷氨酸钠的复原乳中进行混菌发酵，发酵结束后得到发酵乳饮料。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混菌发酵接种量数量级为10⁷CFU/mL，其中短乳杆菌、保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌的比例为(3～4):(0.8～1.2):(0.8～1.2)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有L-谷氨酸钠的复原乳的具体成分为：每1L水中加入11％脱脂乳，5％蔗糖，0.5％酵母提取物，0.1％L-谷氨酸钠。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养，培养条件为37℃，培养9h，4℃后熟12h。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述富含γ-氨基丁酸的发酵乳制备方法，是使用短乳杆菌GDMCC No.60605的冻干菌粉。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述冻干菌粉的制备方法包括：复苏活化发酵菌种后进行菌种扩大培养，获得扩大培养液并离心分离菌体，再利用生理盐水洗涤所得菌体，添加保护剂然后进行冷冻干燥得到冻干菌粉。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述冻干菌粉的制备方法如下：

1)复苏、纯化和活化发酵菌种；

2)将步骤1)所得的发酵菌种进行扩大培养，获得扩大培养液并离心分离菌体；

3)利用生理盐水洗涤步骤2)所得的菌体，添加保护剂然后进行冷冻干燥得到冻干菌粉。

8.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述方法具体步骤如下：

1)将取自-80℃保存的短乳杆菌GDMCC No.60605进行复苏、纯化和活化；

2)按2％的接种量将步骤1)所得的活化的短乳杆菌GDMCC No.60605接种到MRS液体培养基中，在37℃下培养18h，获得扩大培养液，离心分离后获得菌体；

3)用0.85％的生理盐水洗涤步骤2)所得的菌体三次，再将菌体悬浮于13％脱脂乳冻干保护剂中进行冷冻干燥，得到10¹¹CFU/g的冻干菌粉；

4)按10⁷CFU/mL的接种量将步骤3)所得的冻干菌粉与保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌以(3～4):(0.8～1.2):(0.8～1.2)的比例接种到含有L-谷氨酸钠的复原乳中，于37℃下发酵9h，在4℃后熟12h后获得发酵乳饮料；所述含有L-谷氨酸钠的复原乳的具体成分为：每1L水中加入11％脱脂乳，5％蔗糖，0.5％酵母提取物，0.1％L-谷氨酸钠。

9.根据权利要求1-8任一所述方法制备得到的发酵乳。

10.权利要求9所述的发酵乳的应用。所述发酵乳，具有以下性质：

(1)在旷场实验中使小鼠进入中央区域的频率增加了55.4％、使小鼠在旷场中央区域的时间延长了74.3％，而不影响小鼠总运动距离；

(2)在高架十字迷宫实验中能够使小鼠在开臂停留时间延长了54.2％、进入开臂的次数增加了57.2％，与空白组相比有显著性差异；

(3)能够使小鼠戊巴比妥钠诱导的睡眠时间延长284.2％，使巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期缩短26.3％，均有显著性效果。

(4)能够调节肠道菌群，改善肠道环境，显著增加小鼠肠道中Ruminococcus、Allobaculum、Adlercreutzia的相对丰度。