[发明专利]一种双荧光GLUTs示踪质粒、其制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201910462611.0 | 申请日： | 2019-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN110272914A | 公开（公告）日： | 2019-09-24 |
| 发明（设计）人： | 张还添;黎贞燕;查振刚;石毓灵;李雨航 | 申请（专利权）人： | 暨南大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/65;C12N15/66;G01N21/64 |
| 代理公司： | 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙) 44288 | 代理人： | 曾嘉仪;徐朝荣 |
| 地址： | 510000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 荧光 示踪 质粒 质粒片段 制备 基因片段 应用 细胞亚结构 细胞 定位准确 动态定位 细胞毒性 质粒转染 激发光 扩增 显色 激发 融合 观察 | ||
1.一种双荧光GLUTs示踪质粒，其特征在于包括GLUTs基因片段、mCherry基因和pEGFP-C1质粒片段；所述mCherry基因的序列如SEQ ID NO.1所示；所述pEGFP-C1质粒片段如SEQID NO.2所示。
2.如权利要求1所述的双荧光GLUTs示踪质粒，其特征在于，所述GLUTs基因片段为GLUT1基因片段或GLUT3基因片段；所述GLUT1基因片段的序列如SEQ ID NO.3所示；所述GLUT3基因片段的序列如SEQ ID NO.4所示。
3.一种如权利要求1所述的双荧光GLUTs示踪质粒的制备方法，其特征在于包括：
将GLUTs基因片段插入线性pEGFP-C1质粒片段的步骤；以及，将mCherry基因插入线性pEGFP-C1质粒片段的步骤。
4.如权利要求3所述的双荧光GLUTs示踪质粒的制备方法，其特征在于，
将GLUTs基因片段插入线性pEGFP-C1质粒片段的步骤为：将GLUTs基因进行Xhol及KpnI双酶切，得到GLUTs基因片段；将GLUTs基因片段插入pEGFP-C1质粒片段中，得到pEGFP-GLUTs质粒。
5.如权利要求4所述的双荧光GLUTs示踪质粒的制备方法，其特征在于，所述GLUTs基因片段为GLUT1基因片段；
所述GLUT1基因片段进行Xhol及KpnI双酶切的引物为：
GULT1-Xhol-F：TAAACTCGAGACATGGAGCCCAGCAGCAAGAAG；
GULT1-KpnI-R：CTGGTACCTGGTGATCTGGGGCGACTCAC。
6.如权利要求4所述的双荧光GLUTs示踪质粒的制备方法，其特征在于，所述GLUTs基因片段为GLUT3基因片段；
所述GLUT3基因片段进行Xhol及KpnI双酶切的引物为：
GLUT3-XhoI-F：TAAACTCGAGCGATGGGGACACAGAAGGT；
GLUT3-KpnI-R：CTGGTACCGAGGTGGAAGGAGGCACGACT。
7.如权利要求3所述的双荧光GLUTs示踪质粒的制备方法，其特征在于，将pEGFP-C1质粒进行Xhol及KpnI双酶切，回收4700bp的质粒片段，得到pEGFP-C1质粒片段。
8.如权利要求3所述的双荧光GLUTs示踪质粒的制备方法，其特征在于，
将mCherry基因插入线性pEGFP-C1质粒片段的步骤为：将mCherry基因插入含有GLUTs基因片段的线性pEGFP-C1质粒片段中，得到双荧光GLUTs示踪质粒。
9.一种双荧光GLUTs示踪质粒的应用，其特征在于，所述双荧光GLUTs示踪质粒包括GLUTs基因片段、mCherry基因和pEGFP-C1质粒片段；将双荧光GLUTs示踪质粒转染细胞，然后以激发光激发，观察其显色情况，得到GLUTs在细胞中的定位。
10.如权利要求9所述的双荧光GLUTs示踪质粒的应用，其特征在于，显色情况为绿色或黄色，为GLUTs在细胞的质膜或内吞体定位；显色情况为红色，为GLUTs在细胞的溶酶体定位。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于暨南大学，未经暨南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910462611.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
