[发明专利]一种用于HPV检测的探针及检测方法在审
| 申请号： | 201910466192.8 | 申请日： | 2019-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN110172530A | 公开（公告）日： | 2019-08-27 |
| 发明（设计）人： | 郎秋蕾;钱刚;方超;蔡霖霖;殷楠楠;刘歆;李璐璐 | 申请（专利权）人： | 杭州链康医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6806;C12N15/11;C12Q1/6869;C12R1/93 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 310018 浙江省杭州市杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 探针 检测 基因组文库 高通量测序 片段化产物 基因组DNA 捕获产物 待测样本 术后诊断 数据分析 探针制备 文库构建 杂交产物 早期筛查 整合位置 致病机制 准确度 片段化 磁珠 制备 捕获 个性化 杂交 感染 疾病 覆盖 分析 | ||
1.一种用于HPV检测的探针，属一种RNA，其特征在于，制备过程包括以下步骤：进行两轮PCR反应，每次PCR反应后进行磁珠纯化；PCR产物质控；T7体外转录；探针纯化；探针质控、贮藏。
2.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，是一种寡聚核苷酸。
3.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述探针是从50到200个核苷酸的长度。
4.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述探针被生物素标记。
5.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，生物素标记探针中的尿嘧啶。
6.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，被生物素标记的尿嘧啶与未被生物素标记的尿嘧啶的比例大于1:10。
7.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，被生物素标记的尿嘧啶与未被生物素标记的尿嘧啶的比例小于1:2。
8.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述的第一轮PCR正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
9.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述的第一轮PCR反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
10.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述的T7体外转录PCR引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
11.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述的两次PCR反应过程包括活化步骤、变性步骤、退火步骤、延伸步骤和保持步骤。
12.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述的两次PCR反应体系及反应条件分别如下：
1)使用PCR引物进行第一轮PCR反应，PCR反应体系如下：
在PCR仪中执行以下反应程序
2)使用PCR引物进行第二轮PCR反应，PCR反应体系如下：
第二次PCR反应程序如下：
13.一种用于HPV的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：制备DNA模板，片段化基因组DNA，纯化片段化产物，基因组文库构建，PCR扩增基因组文库，探针与基因组文库杂交，磁珠捕获杂交产物，对得到的捕获产物进行高通量测序及结果分析。
14.根据权利要求13所述的探针，其特征在于，探针浓度比DNA模板浓度高100倍到500倍。
15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述的待测样品为宫颈脱落细胞样本、组织切片、石蜡包埋组织和血浆中的一种或多种。
16.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述待测样品总量为200ng-1μg，浓度不低于10ng/μL。
17.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述待测样品浓度不低于10ng/μL。
18.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述的磁珠捕获杂交产物步骤选用的是链霉亲和素磁珠。
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