[发明专利]一种高效分离检测苯酞衍生物的高效液相色谱法及其应用

说明书

一种高效分离检测苯酞类衍生物的高效液相色谱法，采用苯基‑己基色谱柱或苯基柱，检测波长为226‑230nm或280nm，流速为0.8‑1.2ml/min，柱温为20‑35℃，进样量为10‑100μl，流动相由A相和B相组成，流动相中A相:B相混合的体积比为60：40‑80:20，A相为pH值3‑5的水溶液，B相中乙腈与甲醇的体积比为1：0.8‑1.2。本发明的方法具有专属性好、分离度高、灵敏度优异等优点，可以实现十余种苯酞衍生物的有效分离，可用于苯酞衍生物的分离、含量测定或其有关物质的监控与检测、分离纯化，以便更好地控制这些原料及其制剂的质量，以保障药品的有效性、安全性并实现药品质量可控。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种高效分离检测苯酞衍生物的高效液相色谱法及其应用。

背景技术

苯酞也称作邻羟甲基苯甲酸内酯，结构特征为γ-内酯(A环)与苯(B环)的双环融合，是γ-羟基羧酸失去1分子水而形成的内酯。已有研究表明，很多苯酞类化合物具有药理活性，能够应用于心脑血管疾病的预防或治疗。丁苯酞是我国自主研究开发的第三个新化学实体药。2-(α-羟基戊基)苯甲酸药用盐已进入临床开发阶段。另有文献报道了3-丁烯基苯酞具有抑制血栓烷合成的活性。此外，3-(3’-羟基)-丁苯酞、3-羟基-3-丁苯酞(又称3-正丁基-3-羟基-1(3H)-异苯并呋喃酮)均为具备药理活性的丁苯酞衍生物。前述苯酞类化合物结构近似，在合成制备中可以选择相同的起始原料和中间体进行合成。苯酞类化合物不稳定，易受光照、温度等因素的影响而发生变化和相互转化。且在生产过程中，起始原料、中间体、聚合体、副反应产物、贮藏过程中的降解产物等，都可能被带入终产品成为杂质而影响产品质量。因此，研究制定科学合理的分离检测方法测定苯酞类药物含量及其有关物质，对于保障苯酞类衍生物药品质量具有十分重要的意义，以保障药品的有效性和安全性，进而实现药品质量可控。

丁苯酞的国家药品标准WS1-(X-124)-2005Z公布了丁苯酞的含量及有关物质的检测方法。该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇:水(65:35)为流动相，检测波长280nm，分离度测试溶液为含有丁苯酞和丙苯酞的甲醇溶液。

李婕等采用超高效液相-三重四级杆质谱联用技术对丁苯酞原料药的杂质谱进行分析，公开了丁苯酞在碱条件下生成大量的杂质1(2-(1-羟戊基)-苯甲酸)，杂质1进一步降解的少量杂质3(2-(1-氧代戊基)-苯甲酸)，杂质2为邻苯二甲酸酐法引入的工艺杂质。高效液相部分采用C18色谱柱，流动相为甲醇-0.1％甲酸溶液(60∶40)。

中国专利申请CN201610395891.4公开了一种高效液相色谱法分离测定丁苯酞及其有关物质的方法。该方法通过高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.2％磷酸氢二钠和乙腈为流动相进行梯度洗脱，检测波长为226～230nm。该方法解决了邻苯二甲酸、中间体I、中间体II、丙苯酞、丁烯基苯酞、双丁基苯酞杂质与主成分难以分离的问题。该专利的有关物中不包括苯酞和3-正丁基-3-羟基-1(3H)-异苯并呋喃酮，无法对有关物质苯酞和3-正丁基-3-羟基-1(3H)-异苯并呋喃酮实现分离测定。除此之外，该专利记载的测定方法不能对以上六种杂质之外的其他苯酞衍生物杂质进行有效的分离和检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效液相检测方法，该方法通过优化色谱条件和梯度洗脱条件，实现十余种苯酞衍生物的有效分离，并具有专属性好，灵敏度高等优点，可用于苯酞衍生物的分离、含量测定、制备纯化或其有关物质的监控。

本发明的目的之一在于提供一种高效分离检测苯酞类衍生物的高效液相色谱法，其特征在于，该方法采用苯基-己基色谱柱或苯基柱，检测波长为226-230nm或280nm，流速为0.8-1.2ml/min，柱温为20-35℃，进样量为10-100μl，流动相由A相和B相组成，其中，流动相中A相:B相混合的体积比为60：40-80:20，A相为pH值3-5的水溶液，所述的B相为由乙腈和甲醇组成的混合溶剂，B相中乙腈与甲醇的体积比为1：0.8-1.2。